关于UEA染色的问题

Diane0321

实验需要标记epc，想做个UEA染色，想请教一下各位，是消化成细胞悬液再染色，还是直接染贴壁的细胞呢？这两者各有什么优缺点？染色对细胞的影响大不大？会造成细胞死亡吗？染完之后荧光能持续多久呢？以下是我准备的实验步骤，还请大家批评指正，谢谢！0 B7 P$ O- q% _8 [* T
(1)        用TrypLE酶消化EPCs；
& D9 A7 E& i# v9 i6 c' b9 L' @. y(2)        用2ml DPBS将消化后的细胞洗涤一次；
& a! D6 ?1 }' D+ e  j(3)        将收集的EPCs悬于UEA染液中（染液浓度为2.5μl/ml）；
7 x% @9 M# H6 x5 z(4)        室温下避光染色30min后，用DPBS洗涤两次；
0 ]: h# d- _0 ~(5)        将细胞重悬于培养基中。
: t* K7 I' b$ V  f( ?* O' C

Diane0321

回复 honey棉花 的帖子" H0 ^- T3 z8 g; x

& ^! [8 A% Z, K- K+ |" x8 t) B) c% u: q嗯嗯，非常感谢你的帮助

honey棉花

想知道你的目的是鉴定不咯？直接染贴壁细胞就可以了% Y. a& O" R% e6 y2 y0 N
1、体外培养EPCs 至80%融合，弃去培养基，用DPBS 洗涤一次8 e( [; z& o' p2 o# f
2、按照1:400 加入UEA-1 染液，37℃孵育20 min （按试剂盒操作说明）" m( \' d+ p/ p
3、弃去染液并用DPBS洗涤一次后，加入1 ml 4% 多聚甲醛固定液固定15 min 后- ?& s' z; l5 X! y3 W/ P
4、弃去固定液并洗涤一次后，加入1 ml 按1:20000 稀释的DIPA 染液染核3 min，
/ [: A6 f1 N3 ^& c9 s5、荧光显微镜下观察拍照。! _% \* X+ `6 Z( y0 t; M
在荧光显微镜下可以看到鹅卵石形态的EPC结合UEA-1而成红色，如果不需要染核的话，可以在第2步就进行观察了
  x: g# w, b% V希望对你有帮助