关于UEA染色的问题

Diane0321

实验需要标记epc，想做个UEA染色，想请教一下各位，是消化成细胞悬液再染色，还是直接染贴壁的细胞呢？这两者各有什么优缺点？染色对细胞的影响大不大？会造成细胞死亡吗？染完之后荧光能持续多久呢？以下是我准备的实验步骤，还请大家批评指正，谢谢！
3 t) }$ G3 p/ w+ V+ h: E(1)        用TrypLE酶消化EPCs；
' m- \$ p4 w  x% E  I7 S7 }6 F  D, d7 v(2)        用2ml DPBS将消化后的细胞洗涤一次；
9 m; {3 ^  o1 c. T. G9 @+ g5 b(3)        将收集的EPCs悬于UEA染液中（染液浓度为2.5μl/ml）；
/ ^; q3 a7 T+ b& S" @5 I' v(4)        室温下避光染色30min后，用DPBS洗涤两次；6 }' f" v. r4 o: W. ^! f6 w7 y
(5)        将细胞重悬于培养基中。1 y' m- b& y" ~, w: s! y

honey棉花

想知道你的目的是鉴定不咯？直接染贴壁细胞就可以了
1 U0 `) Z  m. i1、体外培养EPCs 至80%融合，弃去培养基，用DPBS 洗涤一次1 G6 R, \" }1 E9 P( r3 E8 A/ [
2、按照1:400 加入UEA-1 染液，37℃孵育20 min （按试剂盒操作说明）5 @. o) a2 c4 Q" N, I1 ]
3、弃去染液并用DPBS洗涤一次后，加入1 ml 4% 多聚甲醛固定液固定15 min 后
& `! I- X3 w% k/ B4、弃去固定液并洗涤一次后，加入1 ml 按1:20000 稀释的DIPA 染液染核3 min，
* N* o8 }+ t) U8 r" h( z5、荧光显微镜下观察拍照。
. V/ E: q) C. K8 _, e# g在荧光显微镜下可以看到鹅卵石形态的EPC结合UEA-1而成红色，如果不需要染核的话，可以在第2步就进行观察了8 j! T, g3 J. I  k
希望对你有帮助

Diane0321

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3 Q. i8 I' E; Y/ g0 c; K. T! }( U' f嗯嗯，非常感谢你的帮助