关于UEA染色的问题

Diane0321

实验需要标记epc，想做个UEA染色，想请教一下各位，是消化成细胞悬液再染色，还是直接染贴壁的细胞呢？这两者各有什么优缺点？染色对细胞的影响大不大？会造成细胞死亡吗？染完之后荧光能持续多久呢？以下是我准备的实验步骤，还请大家批评指正，谢谢！$ c2 B5 d! H! @3 _9 r, q" x$ M
(1)        用TrypLE酶消化EPCs；
: W3 v9 m$ k' {& k/ _" W(2)        用2ml DPBS将消化后的细胞洗涤一次；
6 @% E* T, P  _2 P, ?9 m(3)        将收集的EPCs悬于UEA染液中（染液浓度为2.5μl/ml）；
0 U( N5 }& D6 R# L! q(4)        室温下避光染色30min后，用DPBS洗涤两次；
& g8 P) A' V# I: C. e  E1 ^/ @(5)        将细胞重悬于培养基中。0 w. T: j- w! o5 _6 B! q

honey棉花

想知道你的目的是鉴定不咯？直接染贴壁细胞就可以了; G1 o1 |% L* @8 o3 q! y9 ?5 [
1、体外培养EPCs 至80%融合，弃去培养基，用DPBS 洗涤一次& k5 X, u* x2 g- i: N8 g
2、按照1:400 加入UEA-1 染液，37℃孵育20 min （按试剂盒操作说明）
/ u) ^* A; s7 V" a6 r4 h, \* S3、弃去染液并用DPBS洗涤一次后，加入1 ml 4% 多聚甲醛固定液固定15 min 后
3 q* f+ d( W+ z4、弃去固定液并洗涤一次后，加入1 ml 按1:20000 稀释的DIPA 染液染核3 min，. r- ^4 c6 u- q8 F
5、荧光显微镜下观察拍照。$ r% H$ o5 }9 @+ A6 n( u
在荧光显微镜下可以看到鹅卵石形态的EPC结合UEA-1而成红色，如果不需要染核的话，可以在第2步就进行观察了
5 n. u9 z/ @1 o# r" g希望对你有帮助

Diane0321

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- T+ _& n& w" _( o! d  P& V嗯嗯，非常感谢你的帮助