关于UEA染色的问题

Diane0321

实验需要标记epc，想做个UEA染色，想请教一下各位，是消化成细胞悬液再染色，还是直接染贴壁的细胞呢？这两者各有什么优缺点？染色对细胞的影响大不大？会造成细胞死亡吗？染完之后荧光能持续多久呢？以下是我准备的实验步骤，还请大家批评指正，谢谢！
+ D, A2 o/ A1 i& [; y(1)        用TrypLE酶消化EPCs；
8 u6 Z' m1 ?3 R(2)        用2ml DPBS将消化后的细胞洗涤一次；( @) P+ _3 G- Z( Z& r
(3)        将收集的EPCs悬于UEA染液中（染液浓度为2.5μl/ml）；
4 K9 M% l) }, {: q# p/ U(4)        室温下避光染色30min后，用DPBS洗涤两次；
; o' d9 X) E/ m; x2 f2 ]8 p) P(5)        将细胞重悬于培养基中。
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honey棉花

想知道你的目的是鉴定不咯？直接染贴壁细胞就可以了- Q7 v% T) d  x8 f  L
1、体外培养EPCs 至80%融合，弃去培养基，用DPBS 洗涤一次
/ G2 Q# i2 M# T) G7 @2、按照1:400 加入UEA-1 染液，37℃孵育20 min （按试剂盒操作说明）
% U) J; h- P7 k+ q) I$ l3、弃去染液并用DPBS洗涤一次后，加入1 ml 4% 多聚甲醛固定液固定15 min 后. B1 Q: i$ o9 f% ?% `6 H! l5 b9 |
4、弃去固定液并洗涤一次后，加入1 ml 按1:20000 稀释的DIPA 染液染核3 min，' |  p% Y% L+ T: c
5、荧光显微镜下观察拍照。
6 X/ S4 A" s; ~$ P9 Q6 r! y0 y3 E0 |在荧光显微镜下可以看到鹅卵石形态的EPC结合UEA-1而成红色，如果不需要染核的话，可以在第2步就进行观察了
* i' V1 d, D- |9 r& V% d/ z希望对你有帮助

Diane0321

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9 q: {. d8 X$ y$ y2 i' b4 M4 I3 g嗯嗯，非常感谢你的帮助