关于UEA染色的问题

Diane0321

实验需要标记epc，想做个UEA染色，想请教一下各位，是消化成细胞悬液再染色，还是直接染贴壁的细胞呢？这两者各有什么优缺点？染色对细胞的影响大不大？会造成细胞死亡吗？染完之后荧光能持续多久呢？以下是我准备的实验步骤，还请大家批评指正，谢谢！
& h$ f. a+ c: U& m) ?4 z) x" K! |(1)        用TrypLE酶消化EPCs；9 H! _/ i& T; D% v) E
(2)        用2ml DPBS将消化后的细胞洗涤一次；
) X9 L) V2 ^; u! g: {(3)        将收集的EPCs悬于UEA染液中（染液浓度为2.5μl/ml）；
' L# V7 C( D; b6 A, G1 `& d(4)        室温下避光染色30min后，用DPBS洗涤两次；0 v6 X( j. L" Y9 ?) z) g, t0 e
(5)        将细胞重悬于培养基中。$ Q% t9 O) @: P- v9 e/ m, R

honey棉花

想知道你的目的是鉴定不咯？直接染贴壁细胞就可以了2 ?/ ~, Z' l9 b+ B, ~+ m1 A1 ^8 H
1、体外培养EPCs 至80%融合，弃去培养基，用DPBS 洗涤一次
: A6 |. O( F- F  G- X  J2、按照1:400 加入UEA-1 染液，37℃孵育20 min （按试剂盒操作说明）
) p! H7 P0 j4 T# Y( _3、弃去染液并用DPBS洗涤一次后，加入1 ml 4% 多聚甲醛固定液固定15 min 后
, w- Q0 b) A0 ?& p2 Q4、弃去固定液并洗涤一次后，加入1 ml 按1:20000 稀释的DIPA 染液染核3 min，" I! ?& w4 x- |6 `
5、荧光显微镜下观察拍照。
6 G% x) E1 h6 j2 h  I在荧光显微镜下可以看到鹅卵石形态的EPC结合UEA-1而成红色，如果不需要染核的话，可以在第2步就进行观察了: r  i/ y0 u+ m5 V) j3 a0 a
希望对你有帮助

Diane0321

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7 E  h) c  M' s) {+ b: F, @/ d3 p
嗯嗯，非常感谢你的帮助