［求助］这份PBMC怎么回事儿？

nailute1985

事情是这样的，我用同一份脐带血提的PBMC，分成两组，第一组加的是可溶性的OKT3，第二组是包倍的OKT3。但是发现在我把第一组PBMC加到瓶子里面之后，过了仅10几分钟，就有很多细胞贴壁死亡了。虽然我们原来做的PBMC有一部分肯定是也会贴壁，但是都是正常的单核细胞贴壁，折光度很好的。这次这个都是黑色的死细胞，而且死亡事件太快了！如果是细胞问题的话，另一份加到包倍后的瓶子里的细胞就没事儿。求解……. i8 S3 n' D- ~; h
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上图是第一组* i& t/ x. l. o3 S- z$ W
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这是第二组; b5 n: w+ Z  M( z1 o4 h3 o

ALBERTSIGMA

试剂问题吧。。不然不会死这么快的

ALBERTSIGMA

试剂问题吧。。不然不会死这么快的

nailute1985

回复 zwlcxx 的帖子
4 i1 ~& Q$ _) D
3 v# N6 A. j& @两个都是10X 而且我没加血清，我用的是HSA
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zwlcxx

回复 nailute1985 的帖子$ ^3 B2 ]+ l! \( h+ N- c7 W
' G3 i/ m6 t: a/ m: I- D$ v- T+ v
您这两份细胞，第一张图应该是25倍物镜吧，能看出细胞碎片，可能是血浆里的成分，血浆是不是经过灭活后没有离心彻底？第二张图是4倍物镜，细胞密度略大，看不出瓶底的杂质。两份细胞看起来都是正常的。

nailute1985

回复 momoenn 的帖子6 _; E" U8 V1 u/ U

, Z, p, K$ }% Y4 f2 t4 h还行，不错

momoenn

你的细胞现在怎么样了

quanquan326

回复 我是传奇 的帖子
6 v" z2 C/ k7 @* q1 v: ~' A' }" E& v9 {& K7 J; A/ g
很对，赞同

我是传奇

你说的这个应当是贴壁的，但不见得就是死了的，包被的会比较匀称，不会出现细胞过度集中的情况，可溶的媒介是什么，若果添加因子未混匀的话因子也会逐渐沉降（无论TC处理或未处理的容器），形成局部细胞浓度过高。逐渐会死，但不会你说的这么快。

nailute1985

回复 gxbzjznn 的帖子
0 m  b1 R# |* e8 R  B- G' O* J, B
8 O3 ~  b4 M" u' [! v3 [贴壁的PBMC如果是活的话，折光度很好，而且只是不会移动而已，这个黑色的难道不是死了的细胞么？活细胞就算贴壁尤其是PBMC的话 也不是这样子的啊
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