求助各位亲，PBMC分离出来红细胞过多，如何再尽量PBMC损失最少的情况下减少红细胞呢？

stella2015

各位亲友们，求助一下，有没有其他相对好的办法使得PBMC损失最少，而红细胞能尽量清除掉，不影响PBMC的培养，红细胞裂解液是一个方法，有使用过的亲能推荐一下好的品牌吗？？谢谢！~~~~

nailute1985

回复 stella2015 的帖子/ I. z! ~* U0 N# X. P8 K" _

1 A3 s4 S& }$ J0 q+ IGE life science的ficoll分离效果不错，但是就是贵。

biluolinyu

ge的ficoll效果确实很好' u# b* M" Y) K6 @" Y" u8 P8 J
ficoll分离的时候一定要注意离心条件，离心条件的差别会影响分离效果

LVXUEYAN1101

PBMC分离的时候FICOLL和离心条件很重要。首先FICOLL品牌很重要，其次使用之前最好室温预热；离心的时候升降速一定要调节好

拉二胡的拉尔夫

1.采血以后，一定要用生理盐水充分稀释。
. O1 x1 u4 ]% X8 F/ X2 G. w/ q2.注意ficoll的离心转速，降速一定要慢。
- T  F: t4 z# g2 U6 O: ]) P2 K3.吸白膜层的时候一定小心不要插入过深。
9 p3 R: E+ D% [1 Z. R& ^: d* q( ]4.以上都不行可以试试磁珠分选。
: m7 z0 \1 N  U/ \  J5.其实有点红细胞问题不大，有文章还报道过，红细胞还能促进免疫细胞成熟和增殖。

zhouweixing000

首先一点你实验室要有一套成熟的实验方案，
% S% z, X' r! W再有就是把每一步的试剂特性把握好，& b# Q) |1 o$ o1 Z8 I) i
再有就是个人的操作水平了，) W; R- b4 E( p0 }/ M$ ^, K, c* `5 F
在一个试验中这三点你要都做好了，' r# Q5 i* y) q# n6 v
实验结果自然就比较理想了。

生物太次郎87

①样品质量。血液样品要新鲜，有一点点凝血分离出的效果就不太好。②分离液的质量。我们公司淋巴细胞分离液都是自己配的，分离效果不太好。一般都是分离2次，第一次用50ml离心管（装20ml分离液）。第二次用15ml离心管（装5ml分离液）。③离心条件。条件不合适，白细胞损失就比较多。其实红细胞多也没事，我养悬浮细胞，红细胞多，连红细胞裂解液都不用，哈哈，直接传代到100ml体积时，半量换液，之后越来越好养了。有需要交流，可进一步讨论。

Liyun65

小心操作还是很好分离的，有少量的红细胞应该是没有关系的。
7 q1 J" U9 _: P* _% E- v$ a要分离的血液要新鲜，放置几分钟到室温。分离液也要提前从冰箱拿出来，放置到室温。还要注意分离液和血液的比例。加入血液时注意分层界面要清晰。离心注意缓升缓降就好。

伊诺强

几个注意点：一、ficoll管使用前离心；
$ r$ [  b1 r0 U3 c& ~( e1 E            二、血液到了后需混匀，再轻轻地转移到ficoll上，一定要轻！每管的血液添加量不要过多，一般不要超过ficoll量，或者更少；) S9 p* e( n4 K  h6 c. i
            三、如遇到已有溶血现象，可用生理盐水或PBS二倍稀释后再转至ficoll上；  h7 O8 V) I5 ?) P2 K
            四、提取PBMC时一定要稳、准、狠，争取一次性连续的取完，血浆可以多保留些，血浆中也有部分PBMC。
" j' v; q6 E. M2 ~5 _  N            五、因为不知道您具体要洗几次，所以建议可以适当增加合适的离心梯度。
3 j, x' \1 x% l# y! s            另外，目前有成品分离管，分离效果还不错，PBMC收集率挺高的，但是也要注意加血时要轻。希望能帮到您！

xiepu1

3 L9 ]) |$ h. ~: @1 \" U! O7 M4 D) `% l4 J
首先血液质量要好，样品到后要立马开始处理，$ I/ O# R( V# j' E) ?; u
其次血样尽量做到1:1稀释或大于，" `6 e8 h4 K4 e+ l6 D+ T6 w1 d0 I( }
最后血样铺成要先慢后快，铺样过程要均匀