扩增一个基因的片段扩增不出来

微笑流滢

是怎么回事呢？成弥散状！[img][/img]

innatestem

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( d! R4 O  H, L% @5 P0 m- [/ T4 Z, N) g4 f8 h, s
祝好！

innatestem

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# [7 {8 M$ F3 C
% Y/ {/ r: b3 J$ p& C4 `* s4 F建议你分段P，最后再拼接出全长的片段。

微笑流滢

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2 @0 J6 y$ M- X7 Z2 E  w. c) K5 I
) A7 _8 @5 O5 e2 V! n( K亲，这个基因是高GC还有一些重复序列，，该如何扩增呢？只需要扩增这个基因的2000bp就可以了，但是一直扩不出来。也买了公司的适合于扩增高GC的酶，但是这个酶有自己的PCR程序，我试了试，还是啥都没有，我就用常规的PCR程序试了试，还是不行，崩溃

innatestem

针对你的问题，给你几个建议：一.重新设计引物；二.多选取几种不同的模版；三.使用扩增性，保真性更好的 DNA聚合酶（我们一般用的是全式金公司的Fast Pfu，Takara公司的DNA聚合酶）；四.你扩增的目的基因是否具有一些特殊结构，或者具有高GC含量，这种情况下建议你选用适合高GC含量模版的DNA聚合酶（Takara公司有适用于高GC含量的DNA聚合酶）。祝好！

gscao

回复 微笑流滢 的帖子9 t0 M* _! r: \$ J2 h6 E5 g/ ~

* ~+ I! L- c# \' t换好使的Taq酶，可能会有效果。

niliu730323143

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# }. [+ `. f0 T% g8 a$ J$ y2 O+ s' ]# ]
引物的GC含量，退火温度，延伸时间，这三个注意下，看看你自己的酶有没有失效啊。

微笑流滢

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; ]7 [9 h6 S. A0 K- w/ U# M( G0 E$ ^( ?
这是图片

微笑流滢

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/ m% P, \' N( n, K- g2 r
/ L+ C+ t  P4 G; b8 V重新设计了两对，而且也用梯度PCR扩增了，也是弥散，模板也换了

细胞海洋

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$ ~1 `0 p0 G# c  v4 f
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