扩增一个基因的片段扩增不出来

微笑流滢

是怎么回事呢？成弥散状！[img][/img]

niliu730323143

重新设计引物

细胞海洋

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微笑流滢

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重新设计了两对，而且也用梯度PCR扩增了，也是弥散，模板也换了

微笑流滢

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这是图片

niliu730323143

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5 _$ M# W) a$ R0 [" k8 j' `* r9 ]5 s0 o& U- u# q, o
引物的GC含量，退火温度，延伸时间，这三个注意下，看看你自己的酶有没有失效啊。

gscao

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6 U0 g9 @8 J6 ^; L+ @' ?  s' g% G* u5 S' D" O2 v2 r# a3 r; I% I* I
换好使的Taq酶，可能会有效果。

innatestem

针对你的问题，给你几个建议：一.重新设计引物；二.多选取几种不同的模版；三.使用扩增性，保真性更好的 DNA聚合酶（我们一般用的是全式金公司的Fast Pfu，Takara公司的DNA聚合酶）；四.你扩增的目的基因是否具有一些特殊结构，或者具有高GC含量，这种情况下建议你选用适合高GC含量模版的DNA聚合酶（Takara公司有适用于高GC含量的DNA聚合酶）。祝好！

微笑流滢

回复 innatestem 的帖子- B2 I7 Y4 v5 z

' N" r; G- p5 g  W- k. A* m; E亲，这个基因是高GC还有一些重复序列，，该如何扩增呢？只需要扩增这个基因的2000bp就可以了，但是一直扩不出来。也买了公司的适合于扩增高GC的酶，但是这个酶有自己的PCR程序，我试了试，还是啥都没有，我就用常规的PCR程序试了试，还是不行，崩溃

innatestem

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: c5 {+ n6 ]; P* h" r4 @8 ^. }+ o/ W0 @
建议你分段P，最后再拼接出全长的片段。