大鼠BMSC，这个原代的形态如何？

whyme705

新手想请教各位大神们，这样的BMSC形态如何？断断续续养了好几次原代了，感觉每次不是P0就是P1就会老化，心塞' S$ ]' Y3 I. o* A3 Q0 |" l; q

! z* e; |9 m3 F这次的BMSC取自150g左右大鼠，全骨髓贴壁法，24h首次全量换液。培养体系为αMEM+10%FBS+双抗+谷氨酰胺。
  A. X% P& I2 d3 w0 G; i3 l7 Q以下均为原代第4天的图。) W9 F# d0 [$ a& M
感觉很多细胞呈多角形啊
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' j. m: p# ^/ {$ j% M; V另外，有时候感觉原代长得还行，一传代就立马成扁平状了……0.25%胰酶含EDTA，消化控制在2Min左右，还是不行。有没有哪位大神可以不吝赐教？
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whyme705

回复 zhongjianzhj 的帖子
5 n) ~$ K+ Y* [, [, A+ w
; C- i6 A6 X, F  Z2 i0 e: F: t谢谢！ 生长因子指的是bFGF吗？

whyme705

回复 fm001982 的帖子$ {1 Z& V# [) D! Z- d+ t- I
) M1 \3 e( n+ l* e- a2 z
谢谢！ 可是有时候感觉消化了两分钟有的细胞还没有回缩，看很多帖子对于消化难易程度的说法也是各持己见。是不是这部分难以消化的细胞就不是MSC了？

whyme705

回复 fm001982 的帖子- u1 Y1 x: y" I$ V7 E. n; I' Z- q
0 W* Z/ o0 U9 I, d' ]) `
非常感谢你的回答。就是因为周围都没有在养这个细胞的人，所以只能上来发帖问问了。6 X4 d1 g7 I4 F4 ~0 @
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昨晚给原代传代了，还是用的0.25%的胰酶，观察到大部分细胞消化好后即终止，整个消化过程也就1min左右，最后一些吹打不下来的细胞就放弃了。但今早来一看，形态又变大了。, ^9 D) }. u- L8 s: r7 q
如果是胰酶浓度的问题的话，我下次稀释一下试试

whyme705

这是传代后的图。。
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whyme705

回复 fm001982 的帖子; v7 H4 Q) ?0 l' X- F# F5 r/ c

$ t$ [9 q& K' F密度的话 我没有计数 就图里看来 这个密度算稀吗？

whyme705

回复 lgfffancy 的帖子
1 Z: ^% \; w( h; D# s$ ~, p" d' r' ^0 P2 a" w6 v! l
啊，我还看到好多人说80%就该传了……+ c, Z! `: Z; w9 @$ z- e3 @
可能我养BMSC还不是很熟，我感觉原代的细胞分布均匀程度不好控制，而且有时候密集处长到80-90%的时候有的细胞就有老化的迹象了，稀的还是很稀，再传代也救不回来了啊。1 B9 o7 F% \( l' P" V* A) X
勤换液的话，能够防止老化的发生吗？

whyme705

回复 一僧化画 的帖子0 X. z6 c. W* p1 ?1 T. }. [
  R# ^+ f& |( i9 |9 r; y6 L
感谢回答。后来我也用过0.125%的胰酶消化过，但感觉还是不能解决后来老化的问题。
4 Q" M* W  @0 k5 z' Y再后来我换了个专用的BMSC培养基，做过二者的对照，手法跟原来一样，但后来细胞就能长得很好。
, T( [; Z0 T6 D' i' |. f7 Z. d* G2 b8 Z所以我想，是不是我的培养基或者血清的问题，或者可以加点生长因子试试