免疫细胞分离的几种方法

shy-shen

表面标记分子法
' ~: d) [  D9 sE-花环沉降法8 ^3 i' `5 G3 {. B
人类T细胞表面有SRBC受体绵羊红细胞受体，能够与多个SRBC结合，形状如花环；
4 t1 r6 @0 ^# _5 u3 z7 T9 L& D$ z+ U亲和淘洗法5 {2 }: x9 R; T& K, N# t5 L" H' N
特异性单克隆抗体包被在聚苯乙烯培养皿/板表面，吸附具有相应表面分子的目标细胞，如抗Ig抗体吸附B细胞、抗CD3抗体吸附成熟T细胞，这些都属于正选分离/ K) f5 o) E% Z2 y) A2 n
细胞毒法0 y" E4 C3 Y$ Z1 I# j9 A
补体介导的特异性细胞毒分离法，在抗体的作用下裂解能与抗体结合的细胞，从而分离出不能与此抗体结合的细胞群，属于负选方法! i6 W( _9 m  R* i/ D" f% P! F
荧光激活细胞分离法( r2 ?7 W$ a+ [9 @! _
最有效法，目标细胞经荧光素标记单抗结合后，在激发光照射下会产生荧光，由FASC分选功能分选出来) }: ]. I! t% B3 {
免疫磁珠分离法
" f1 q. O1 K% F8 R$ E4 \! d8 Y在磁珠表面包被特异型抗体，与目标细胞表面的抗原结合而与特定细胞粘附，再用磁珠分离
2 f2 L1 z& k& F( G& G/ G' y+ G' c& ?# W
, u* i6 y' W6 ]# q. d$ \对低渗的敏感性9 _) d9 c- w0 k, J: Q
红细胞对低渗的敏感性要高于白细胞，例如红细胞裂解液
+ t! ~$ v- a6 v- ^; b7 Y  @( p% Y3 X, v* C
相对密度差异
+ ?- v5 e* {) M; C5 V聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法即FICOLL
9 V% a" D' H! `0 N9 V红细胞和粒细胞相对密度大于ficoll，沉底；血浆密度最低位于最顶端；分层液位于中间，PBMC位于血浆和分层液的白膜层处
( r2 q. O) X9 y' j% t; tPERCOLL密度梯度离心法
- |1 Q9 Q" v2 m( a+ D最上层是死细胞残片和血小板，然后是单核细胞层，然后是淋巴细胞层，最后是粒细胞和红细胞
! A0 \( F" I/ O8 Y
  |: \  P5 R3 n9 d0 `& C' o. A黏附和吞噬能力  Y* c2 J* j, _8 [" K, L
单核和巨噬细胞具有较强的粘附能力，加入细微的羟基铁颗粒或乳胶颗粒，待单核和巨噬细胞充分吞噬后，用密度梯度离心或者磁场吸附去除，利用尼龙毛柱分离B细胞。5 K5 v- M8 b" _1 R' z/ g' S

. t* Q) F% k% B3 @5 ^9 H  R0 @特异性促生长因子
$ E9 f4 A" j( n/ z% O利用不同种类的免疫细胞需要的生长因子不同进行促进生长