免疫细胞分离的几种方法

shy-shen

表面标记分子法# R5 m: l' W' O& B
E-花环沉降法% E4 n/ @( G: ?$ O" m
人类T细胞表面有SRBC受体绵羊红细胞受体，能够与多个SRBC结合，形状如花环；
3 C. P! K6 T3 H; f" C. \  x亲和淘洗法5 o0 f% W' c# p8 h  ~. K
特异性单克隆抗体包被在聚苯乙烯培养皿/板表面，吸附具有相应表面分子的目标细胞，如抗Ig抗体吸附B细胞、抗CD3抗体吸附成熟T细胞，这些都属于正选分离, ~& |) y  |* y4 P& R, h2 N, V
细胞毒法
9 O: i: Y' c! [3 P+ d- ?补体介导的特异性细胞毒分离法，在抗体的作用下裂解能与抗体结合的细胞，从而分离出不能与此抗体结合的细胞群，属于负选方法
' H8 Z% D$ d$ G) A& y' O7 t6 n0 k1 _荧光激活细胞分离法
/ N9 {6 {  Q; D) _) ^; K  A最有效法，目标细胞经荧光素标记单抗结合后，在激发光照射下会产生荧光，由FASC分选功能分选出来
7 Z' v" f: M, M7 m* t4 {免疫磁珠分离法  j9 }# d4 X8 s! Z$ d) {
在磁珠表面包被特异型抗体，与目标细胞表面的抗原结合而与特定细胞粘附，再用磁珠分离
$ U5 U3 x" ~0 ]% T- M& N! A; e+ |3 Q$ N0 k
对低渗的敏感性/ Y( F4 Z' F; ^; n0 g3 C
红细胞对低渗的敏感性要高于白细胞，例如红细胞裂解液
' r5 v1 j: v) L2 R% j: G- \
9 X& T+ k' J- X/ L' A- ?相对密度差异
3 \5 x& \2 U" e2 k& s; d( _聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法即FICOLL
) W9 g6 M' D" ~* ~0 L红细胞和粒细胞相对密度大于ficoll，沉底；血浆密度最低位于最顶端；分层液位于中间，PBMC位于血浆和分层液的白膜层处+ F. g  Q4 j' d# |$ A" E) v% O3 G
PERCOLL密度梯度离心法5 ^; k4 P3 |3 E6 X8 S* N. j, h
最上层是死细胞残片和血小板，然后是单核细胞层，然后是淋巴细胞层，最后是粒细胞和红细胞
4 h  ?* @6 f) B! X" w& A- c* E+ W/ l' D" Y: r3 z% }6 B
黏附和吞噬能力' n) D2 E, I+ j
单核和巨噬细胞具有较强的粘附能力，加入细微的羟基铁颗粒或乳胶颗粒，待单核和巨噬细胞充分吞噬后，用密度梯度离心或者磁场吸附去除，利用尼龙毛柱分离B细胞。! _3 q+ `( a* R0 b, i( v* W) Y

) D6 f2 n0 u7 X" P特异性促生长因子
6 l+ W  V5 H- V' ?+ H利用不同种类的免疫细胞需要的生长因子不同进行促进生长