外周血单个核细胞分离完有红细胞

lybai

我们的主要操作步骤：
) s' ]. y' B" J1 10ml全血用10ml 1640培养基稀释，轻轻混匀
& p6 v# y6 g* }- T( ?" \2 稀释的血液20ml缓慢加到20ml淋巴细胞分离液（Gibico）上。1500rpm/min, 30min,) V- M# F4 w7 W, z# `1 M. y: _
3 吸取白膜层，然后1:1用PBS洗。2000rpm/min, 10min,6 i: }( v& f6 i  g9 N2 ~
4 弃上清，再次加20mlPBS，吹散细胞，2000rpm/min, 10min( e) a' \5 C+ L' ]( a
5 最后加2ml PBS,计数。6 E! A9 [9 @4 ~, o8 d2 j4 V( A4 x; Q
2 u( M; R9 T) Q
4 l3 q$ Q& h/ j" ^3 x* S
细胞悬液离完心即可看到底部有明显的红色沉积，显微镜下也能看到红细胞，求教各位大神，; x- b3 J& ?3 |2 j7 L
1 我们第一次离心的时候，转速是不是有点低，我查了一下，我们的转速相当于400g离心力，其它有的人用800g,或2000rpm，我们也试过500g离心，离心完之后，细胞很难吹散。
* P9 P8 R  u/ B& \) g5 f2 稀释血液和淋巴细胞分离液的比例，我们用的是1:1，看别人用2:1~3:1,这个对试验影响大么？

lybai

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" `6 Z! Q' L: K" X* h用的湘仪的
* t! a# S- p( ^! ]

lybai

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" C7 O7 n. R( n. J
我们离心的时候，减速设置的是0

lybai

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, Z  _5 g  E4 l4 u1 j, h) W. p
离心完成之后，分层还是很明显的，白膜层很清晰

lybai

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谢谢您提供经验，我们到时候也试试

lybai

谢谢提供经验！