外周血单个核细胞分离完有红细胞

lybai

我们的主要操作步骤：: M& V1 `  v" B
1 10ml全血用10ml 1640培养基稀释，轻轻混匀
. C/ I5 o# z! ]2 稀释的血液20ml缓慢加到20ml淋巴细胞分离液（Gibico）上。1500rpm/min, 30min,/ H: j, t( O. l+ i
3 吸取白膜层，然后1:1用PBS洗。2000rpm/min, 10min,
7 N( E9 }1 [9 G$ X4 i4 弃上清，再次加20mlPBS，吹散细胞，2000rpm/min, 10min. q1 Z9 L5 F, Q
5 最后加2ml PBS,计数。  l- L) e8 m* N9 y/ I

4 X0 |' v  k: T. G  q
7 o) o* P/ r% J2 H8 t  a细胞悬液离完心即可看到底部有明显的红色沉积，显微镜下也能看到红细胞，求教各位大神，
2 Z: M# O* o8 |0 W4 A1 我们第一次离心的时候，转速是不是有点低，我查了一下，我们的转速相当于400g离心力，其它有的人用800g,或2000rpm，我们也试过500g离心，离心完之后，细胞很难吹散。6 `$ ^" O6 H3 g" _7 k6 P
2 稀释血液和淋巴细胞分离液的比例，我们用的是1:1，看别人用2:1~3:1,这个对试验影响大么？

lybai

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4 q/ S' _8 E4 c- W0 P
用的湘仪的
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lybai

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/ U/ B5 h& ^# |8 ?' D2 M% m
4 ^+ A: L5 T- a$ b" c) R, H我们离心的时候，减速设置的是0

lybai

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; p" q0 ^, f3 u5 q5 H6 @- q2 u5 x3 q  w/ X9 G% O2 [3 m
离心完成之后，分层还是很明显的，白膜层很清晰

lybai

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3 U2 h7 @4 P& N: ?, n- `$ @5 F/ O8 x! ~. V2 z. J: d+ _) V* m
谢谢您提供经验，我们到时候也试试

lybai

谢谢提供经验！