CIK培养时，国产细胞因子浓度要增加么？

lybai

目前我们做CIK培养时，用的国产细胞因子，干扰素为1000U/ml,   OKT3为50ng/ml.   IL-2为500U/ml, 效果不好，数量级达不到，请问国产因子浓度需要加大么？

阿秀哥

我们IL-2是1000U/ml，效果还行，楼主可以试试，仅供参考，希望对你有用

lyj-0017

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6 E* ]& w9 V: N3 E' u% M" \/ m3 r/ I! Z6 X: c, @. [) E
可以把你大体的操作流程发一下让大家帮你分析一下，单纯这样说看不出为啥数量级达不到的原因。

lybai

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0 Q1 l7 l7 Y3 {) T  b6 L- x& r' x* G& C! D% j
抽了20ml正常人的血，分离出PBMC，分完能看到明显红细胞。2 n% k+ b! l% m6 g' q7 b9 A+ p$ x
第0天：接种浓度1.1*10的6次方/ml, 用Gibco AIM-V培养基25ml，接种时加入了伽马干扰素，' b5 _& G) l  \" |0 h
第1天加入CD3，IL-2，浓度如第一个帖子，" l4 y/ `# y4 }9 ^
第3天，培养基颜色变化不大，计数为3*10的6次方，补液25ml,添加IL-2
5 v$ N: Z, n- c第8天，培养基颜色变黄，计数3.7*10的6次方，补液50ml,添加IL-2.
, a1 Z, F. k$ X3 v6 M8 H第10天，颜色稍微变黄，计数6*10的6次方，补液100ml,添加IL-2+ C6 y3 x' b7 O1 G0 X3 P: M9 e+ g9 p  [
第13天，培养液颜色没什么变化，计数1.8*10的6次方，

lybai

第0天还加入了1%的自体灭火血浆，忘记说了

rzghc

新因子可以做一下不同因子浓度的预实验，确定最佳范围

lybai

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" v" v  u. }; i" _$ n1 H
! a* c8 |- d) T% ?2 w/ e谢谢您提供经验。

wzs1985

各种因子的活力是一种ED50的即半价有效量。各个公司的因子活力不同，有个半价有效量是1ng/ml，而有的可能是0.2ng/ml。所以你要根据这个半价有效量来调整你所添加的因子浓度。

lybai

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, U3 r4 ~$ f; f/ C5 _& j" u$ V) K8 J! L7 N
这个ED50需要自己测吗？没看到购买的CD3单抗上有标注ED50，其它因子直接标注了活性如10*7IU/mg,培养时，我看只有CD3单抗用的单位是ng/ml,其它都是活性单位IU/ml,这个已经是活性单位了，还要换算么？
6 r% O, o) T8 l+ C6 t) t

lyj-0017

回复 lybai 的帖子6 Q: `/ m- g/ r7 I+ U' N3 T% z

1 O8 R0 ?$ E& ~6 z因子浓度没啥问题，第三天补液太多了，细胞还没开始大量扩增你就稀释一倍。