CIK培养时，国产细胞因子浓度要增加么？

lybai

目前我们做CIK培养时，用的国产细胞因子，干扰素为1000U/ml,   OKT3为50ng/ml.   IL-2为500U/ml, 效果不好，数量级达不到，请问国产因子浓度需要加大么？

阿秀哥

我们IL-2是1000U/ml，效果还行，楼主可以试试，仅供参考，希望对你有用

lyj-0017

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4 F6 }! I+ ?0 R9 n可以把你大体的操作流程发一下让大家帮你分析一下，单纯这样说看不出为啥数量级达不到的原因。

lybai

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# E7 R9 j+ t) U抽了20ml正常人的血，分离出PBMC，分完能看到明显红细胞。3 C' A" O* J! S- o. _' x" `
第0天：接种浓度1.1*10的6次方/ml, 用Gibco AIM-V培养基25ml，接种时加入了伽马干扰素，
3 P! A3 k- C! X" ]$ G0 I第1天加入CD3，IL-2，浓度如第一个帖子，
6 o, p- `2 _  x( X5 m3 u' L6 N第3天，培养基颜色变化不大，计数为3*10的6次方，补液25ml,添加IL-28 {# J% s: X3 ]6 ~2 z$ O  M
第8天，培养基颜色变黄，计数3.7*10的6次方，补液50ml,添加IL-2.% m  ^# K5 [: h  J# x, q
第10天，颜色稍微变黄，计数6*10的6次方，补液100ml,添加IL-25 r* Z& ]5 z5 ~
第13天，培养液颜色没什么变化，计数1.8*10的6次方，

lybai

第0天还加入了1%的自体灭火血浆，忘记说了

rzghc

新因子可以做一下不同因子浓度的预实验，确定最佳范围

lybai

回复 阿秀哥 的帖子' r9 B6 U8 q! P, @

8 O. h4 L% I% [6 s* O  y谢谢您提供经验。

wzs1985

各种因子的活力是一种ED50的即半价有效量。各个公司的因子活力不同，有个半价有效量是1ng/ml，而有的可能是0.2ng/ml。所以你要根据这个半价有效量来调整你所添加的因子浓度。

lybai

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( g) T5 k4 T! w* d$ M
. |* b$ i' }2 h9 t, t) v. [这个ED50需要自己测吗？没看到购买的CD3单抗上有标注ED50，其它因子直接标注了活性如10*7IU/mg,培养时，我看只有CD3单抗用的单位是ng/ml,其它都是活性单位IU/ml,这个已经是活性单位了，还要换算么？/ }6 I# G1 X- A, l$ q

lyj-0017

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: M6 x  ^* g! ^$ N9 ?( R/ A# r. W( j# M: t$ F
因子浓度没啥问题，第三天补液太多了，细胞还没开始大量扩增你就稀释一倍。