CIK培养时，国产细胞因子浓度要增加么？

lybai

目前我们做CIK培养时，用的国产细胞因子，干扰素为1000U/ml,   OKT3为50ng/ml.   IL-2为500U/ml, 效果不好，数量级达不到，请问国产因子浓度需要加大么？

阿秀哥

我们IL-2是1000U/ml，效果还行，楼主可以试试，仅供参考，希望对你有用

lyj-0017

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' X6 a: c& A/ k% J& [  T5 v3 O4 Q3 y4 P3 I5 W2 ?
可以把你大体的操作流程发一下让大家帮你分析一下，单纯这样说看不出为啥数量级达不到的原因。

lybai

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2 \+ _: @) `  o, a# I
/ n2 U6 O5 w2 g* m! f# ]2 d抽了20ml正常人的血，分离出PBMC，分完能看到明显红细胞。9 B* B- @# c# o# W7 B2 U/ l8 \7 l
第0天：接种浓度1.1*10的6次方/ml, 用Gibco AIM-V培养基25ml，接种时加入了伽马干扰素，  n7 U8 B7 M; Y
第1天加入CD3，IL-2，浓度如第一个帖子，* E( @3 U' I4 `: q2 G/ |$ `
第3天，培养基颜色变化不大，计数为3*10的6次方，补液25ml,添加IL-2
' X  U1 O/ X5 z( |# b7 }第8天，培养基颜色变黄，计数3.7*10的6次方，补液50ml,添加IL-2.# m* G  ^; n4 \6 l3 h7 n
第10天，颜色稍微变黄，计数6*10的6次方，补液100ml,添加IL-2
* n' Z- o. Q. e) F- y* i8 `8 G, @第13天，培养液颜色没什么变化，计数1.8*10的6次方，

lybai

第0天还加入了1%的自体灭火血浆，忘记说了

rzghc

新因子可以做一下不同因子浓度的预实验，确定最佳范围

lybai

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! m+ r6 x3 O2 [! l
$ K4 c6 X* I2 k4 C: P8 d谢谢您提供经验。

wzs1985

各种因子的活力是一种ED50的即半价有效量。各个公司的因子活力不同，有个半价有效量是1ng/ml，而有的可能是0.2ng/ml。所以你要根据这个半价有效量来调整你所添加的因子浓度。

lybai

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$ p' t) h# T0 v, e5 X( m! o$ N$ D8 o3 ^) A8 D% u; q
这个ED50需要自己测吗？没看到购买的CD3单抗上有标注ED50，其它因子直接标注了活性如10*7IU/mg,培养时，我看只有CD3单抗用的单位是ng/ml,其它都是活性单位IU/ml,这个已经是活性单位了，还要换算么？
" i' ]: n. o  f6 r( C4 x

lyj-0017

回复 lybai 的帖子8 }& g7 i* E3 W- ?+ [, v
/ O$ F$ [, q) [$ p  [
因子浓度没啥问题，第三天补液太多了，细胞还没开始大量扩增你就稀释一倍。