CIK培养时，国产细胞因子浓度要增加么？

lybai

目前我们做CIK培养时，用的国产细胞因子，干扰素为1000U/ml,   OKT3为50ng/ml.   IL-2为500U/ml, 效果不好，数量级达不到，请问国产因子浓度需要加大么？

阿秀哥

我们IL-2是1000U/ml，效果还行，楼主可以试试，仅供参考，希望对你有用

lyj-0017

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9 }1 _& k  t+ `& g1 W1 v/ }  v/ H0 G+ z# G7 ]
可以把你大体的操作流程发一下让大家帮你分析一下，单纯这样说看不出为啥数量级达不到的原因。

lybai

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! _6 @9 `, n# M2 V3 K$ h( F3 W/ ~4 _5 y1 ?
抽了20ml正常人的血，分离出PBMC，分完能看到明显红细胞。$ S: t+ [0 D( A  g; N: t7 O
第0天：接种浓度1.1*10的6次方/ml, 用Gibco AIM-V培养基25ml，接种时加入了伽马干扰素，) a( K4 Q& r' P1 x
第1天加入CD3，IL-2，浓度如第一个帖子，
$ U0 f8 o% W0 F2 g; w- H) L5 x( y1 w第3天，培养基颜色变化不大，计数为3*10的6次方，补液25ml,添加IL-2, \: B- h7 V  w. J
第8天，培养基颜色变黄，计数3.7*10的6次方，补液50ml,添加IL-2.
6 t: u; P6 I/ b6 e  G第10天，颜色稍微变黄，计数6*10的6次方，补液100ml,添加IL-2* x! U2 k; y5 P$ m4 p' ]1 Y
第13天，培养液颜色没什么变化，计数1.8*10的6次方，

lybai

第0天还加入了1%的自体灭火血浆，忘记说了

rzghc

新因子可以做一下不同因子浓度的预实验，确定最佳范围

lybai

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& i4 K( q& T. g+ g
/ L3 X& y$ S) j- H( p" F8 k谢谢您提供经验。

wzs1985

各种因子的活力是一种ED50的即半价有效量。各个公司的因子活力不同，有个半价有效量是1ng/ml，而有的可能是0.2ng/ml。所以你要根据这个半价有效量来调整你所添加的因子浓度。

lybai

回复 wzs1985 的帖子, k% M; d1 ^3 [' e
: a/ A7 P2 n, r* |  N, T# y
这个ED50需要自己测吗？没看到购买的CD3单抗上有标注ED50，其它因子直接标注了活性如10*7IU/mg,培养时，我看只有CD3单抗用的单位是ng/ml,其它都是活性单位IU/ml,这个已经是活性单位了，还要换算么？) v3 Q( D7 L- ]1 e

lyj-0017

回复 lybai 的帖子" Y; w* C. ~4 r& ^8 ~+ F: U7 ]2 |

: |/ J5 e! V# H& [" g因子浓度没啥问题，第三天补液太多了，细胞还没开始大量扩增你就稀释一倍。