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本帖最后由 cloud100 于 2017-5-12 17:25 编辑
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4 I @* x7 Y0 O6 t/ s
! p. [. n, l- X# e我现在养成体NSCs,如图所示,取3月龄大鼠的SVZ和DG取脑组织(可能范围略宽一点),剪碎成约1mm3大小组织块,& q! N2 W3 R0 M- }
用3ml Hank’s液+2.5mg/ml胰酶(gibico)+15mg/ml 木瓜酶(solabio)+2.5mg/ml 2型胶原酶(merk)+0.2mg/ml Dnase(solabio)+0.02%EDTA,
1 Q* v: Z- F2 q; s# ^: O37℃消化 30min,发现组织块消化效果很差,基本上看不出组织块有减少的迹象,经过吹打后,依然有大量组织块,消化得到的细胞也很少。
4 }( g- X' n( C! e# o |- n6 K5 W, S1 Q
我这个酶浓度是反复试验、不断加量到这个剂量的,已经比文献超出了许多倍,但每次都无法取得良好的消化效果。 n' E+ Y+ ~# U H' a
以前养神经元,取新生鼠皮层,1.25mg/ml的胰酶,15分钟,组织块很快就彻底消化干净了,怎么成年鼠的脑组织这么难消化?
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- W4 ?8 ?( }8 g, O& r. @& r4 j请教各位老师,有没有养成体NSCs的经验可以指教的?谢谢。
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