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成体NSCs原代消化酶的问题 [复制链接]

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楼主
发表于 2017-5-12 17:25 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 cloud100 于 2017-5-12 17:25 编辑
1 F3 @2 i; c0 ?6 C& d
  ^6 |& q& L7 B$ v, N9 }& t
4 Z% I4 j% `# n' K8 `, h2 G% G$ |我现在养成体NSCs,如图所示,取3月龄大鼠的SVZ和DG取脑组织(可能范围略宽一点),剪碎成约1mm3大小组织块,! D) b3 ]% K& |& U3 _; U
用3ml Hank’s液+2.5mg/ml胰酶(gibico)+15mg/ml 木瓜酶(solabio)+2.5mg/ml 2型胶原酶(merk)+0.2mg/ml Dnase(solabio)+0.02%EDTA,9 E4 M  @( n! x% F
37℃消化 30min,发现组织块消化效果很差,基本上看不出组织块有减少的迹象,经过吹打后,依然有大量组织块,消化得到的细胞也很少。
( F3 e( d( @$ F* y* A5 V, c+ J' t
. V4 Y# Q. j" G/ \1 ~8 R我这个酶浓度是反复试验、不断加量到这个剂量的,已经比文献超出了许多倍,但每次都无法取得良好的消化效果。
# k) q+ |5 v  y以前养神经元,取新生鼠皮层,1.25mg/ml的胰酶,15分钟,组织块很快就彻底消化干净了,怎么成年鼠的脑组织这么难消化?
+ ^1 u2 ]; d+ [3 ]$ ^5 z
& ]! k3 j( ?% u# w请教各位老师,有没有养成体NSCs的经验可以指教的?谢谢。
5 b" ?: r4 W+ V6 Y5 m
5 w/ K& l: H+ Y) R2 b; L5 ?
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沙发
发表于 2017-5-13 08:03 |只看该作者
消化酶都是现配现用,质量应该不存在问题,胰酶每次拿来传代效果都很好。。胶原酶和木瓜酶都是新买的。
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