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本帖最后由 cloud100 于 2017-5-12 17:25 编辑 0 u' {: I! d0 ~: o
d2 S7 {9 i/ j, y+ Z3 n `, s8 P* t7 R+ g
我现在养成体NSCs,如图所示,取3月龄大鼠的SVZ和DG取脑组织(可能范围略宽一点),剪碎成约1mm3大小组织块,
! d1 d! x0 Q1 D用3ml Hank’s液+2.5mg/ml胰酶(gibico)+15mg/ml 木瓜酶(solabio)+2.5mg/ml 2型胶原酶(merk)+0.2mg/ml Dnase(solabio)+0.02%EDTA,
7 ~& X$ e5 s5 b3 ?37℃消化 30min,发现组织块消化效果很差,基本上看不出组织块有减少的迹象,经过吹打后,依然有大量组织块,消化得到的细胞也很少。
( {& \- w; ?/ h/ d; _: c7 \( `# R( t3 [; O* d
我这个酶浓度是反复试验、不断加量到这个剂量的,已经比文献超出了许多倍,但每次都无法取得良好的消化效果。4 _- e& Y" v3 H( x2 n" N) S
以前养神经元,取新生鼠皮层,1.25mg/ml的胰酶,15分钟,组织块很快就彻底消化干净了,怎么成年鼠的脑组织这么难消化?
. Z. V4 X. u; Z# F" M a: R
1 ^$ r, E7 X9 G F: r$ W请教各位老师,有没有养成体NSCs的经验可以指教的?谢谢。' W5 }4 m9 D, ~$ R( c- Z3 H
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