干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
中源协和

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 28115|回复: 1
go

成体NSCs原代消化酶的问题 [复制链接]

Rank: 1

积分
35 
威望
35  
包包
354  
楼主
发表于 2017-5-12 17:25 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
干细胞之家微信公众号
本帖最后由 cloud100 于 2017-5-12 17:25 编辑
8 t5 L5 W- c. d* }3 D( a+ n8 l1 Z
4 I  @* x7 Y0 O6 t/ s
! p. [. n, l- X# e我现在养成体NSCs,如图所示,取3月龄大鼠的SVZ和DG取脑组织(可能范围略宽一点),剪碎成约1mm3大小组织块,& q! N2 W3 R0 M- }
用3ml Hank’s液+2.5mg/ml胰酶(gibico)+15mg/ml 木瓜酶(solabio)+2.5mg/ml 2型胶原酶(merk)+0.2mg/ml Dnase(solabio)+0.02%EDTA,
1 Q* v: Z- F2 q; s# ^: O37℃消化 30min,发现组织块消化效果很差,基本上看不出组织块有减少的迹象,经过吹打后,依然有大量组织块,消化得到的细胞也很少。
4 }( g- X' n( C! e# o  |- n6 K5 W, S1 Q
我这个酶浓度是反复试验、不断加量到这个剂量的,已经比文献超出了许多倍,但每次都无法取得良好的消化效果。  n' E+ Y+ ~# U  H' a
以前养神经元,取新生鼠皮层,1.25mg/ml的胰酶,15分钟,组织块很快就彻底消化干净了,怎么成年鼠的脑组织这么难消化?
! q* g+ C$ T7 V% Y' K
- W4 ?8 ?( }8 g, O& r. @& r4 j请教各位老师,有没有养成体NSCs的经验可以指教的?谢谢。
+ n2 ~$ @+ g7 p

5 Q  ^7 K  q* z: T; ^
附件: 你需要登录才可以下载或查看附件。没有帐号?注册
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 10 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 1

积分
35 
威望
35  
包包
354  
沙发
发表于 2017-5-13 08:03 |只看该作者
消化酶都是现配现用,质量应该不存在问题,胰酶每次拿来传代效果都很好。。胶原酶和木瓜酶都是新买的。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2026-6-27 22:57

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.