I型胶原酶消化脂肪，提取间充质干细胞过程中，这些间充质干细胞是不是处于饥饿状态呢

sports123

I型胶原酶消化脂肪，提取间充质干细胞过程中，用PBS配置的胶原酶消化30-60min过程中，这些脂肪中的间充质干细胞是不是处于饥饿状态呢，会不会对细胞以后的状态有一定的影响呢？求大神指点。

爱学习的青年

为什么会觉得细胞处于饥饿状态

sports123

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" X5 K. l3 B+ C" r3 o  Q7 d, i在消化的过程中(30-60min),细胞没有接触到任何营养物质，细胞会不会处于饥饿状态呢？

rzghc

" A$ O' G( S' E% u9 @: X" l/ e7 _( n
" W/ T4 h9 W: b" X( S6 B本身新鲜的脂肪组织中就有各种结缔组织、血管、祖细胞提供营养的，消化过程中主要还是胶原酶对细胞的影响大一些，想要消化过程中活率高一些可以使用dmem配置胶原酶，或者可以低温过夜消化组织，不过pbs配置的胶原酶消化完后细胞活率稍低杂质稍多但并不影响后期培养。

sports123

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0 q8 q. {( w% X% l# `* k
. a* [1 v- E% {% A* ~: A请问，用DMEM配置胶原酶还需要加血清吗？

rzghc

回复 sports123 的帖子  s6 \+ K3 c$ U! b

4 a  t0 H6 c& [加血清就终止消化了，不要加

sports123

回复 rzghc 的帖子# a) d/ \8 |# j: }. e. i
+ B% T' W- ~. M1 T; y& j
血清可以终止胰酶，但对I型胶原酶是没有终止作用的

rzghc

回复 sports123 的帖子# M( c$ D  J/ K  u$ Q  U  c0 N
. r& R9 H* r; g' T' E" o
这个倒是没做过实验，以前看文献是有加血清终止，配置不用加的

Amy1114

我们用的胶原酶是用汉克斯液配制的（Gibco的说明书上就是这么写的）。因为汉克斯液里含有葡萄糖，对细胞有营养作用，所以还好。
" U( T% }/ N) a* E- S" [+ J另外脂肪组织取到过后应在4h内处理完毕，得率较高。4°C保存。
: k3 }) L6 N+ N2 [  D6 }. F9 G9 N/ |再有就是，离心的时候建议用低温离心机，4°C离心。: c$ f- H+ P; U# a6 T! O
$ H% U, t* ^) ?- x  J3 l; ?
但是胶原酶消化的时候温度一定是37°C哈

sports123

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) i5 V! n/ c9 N1 d恩恩，谢谢，我们现在用DMEM配，用起来也不错