关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

gsg040222

如何才能更好的加液，分层更好，还有就是离心完后如何才能更好的吸取白层？

筱筠

离心后弃掉血浆层，用和红细胞等量的D-PBS混匀红细胞。缓慢的加入淋巴分离液中，注意淋巴分离液使用温度20加减2摄氏度。离心时离心机条件慢加慢减。吸取白膜层时，移液管在白膜层液面上，慢速环绕吸取。

jiuxuya

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9 i/ A0 w  Y$ b. ?6 ^
8 W2 M  ?2 j1 Q9 p4 ]8 h' W请问有网址吗？想去看看淘宝搜不到。。。

edwardellen

买专用的分离管，现在进口国产的都有，省时省力

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）2 K; |) ?* b5 L
2重悬混匀（不能有团块）2 [7 O! c  c1 J* }- _
3血液与分离液比例1:1
3 e; M& r3 t+ D2 a$ \* A) h4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降5 w% w! {; {! b+ l) d4 y; B% }
5离心升10降19,600G
$ U7 _9 G* X1 o2 H' z$ }9 e6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。
. K! h2 @0 O2 E: v5 t2 ?3 P4 z% ?7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体
8 U/ t( T+ i- {/ K8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min5 I) E6 {6 w5 K- e3 `/ \
9培养
1 V# `1 Y/ W  g2 \2 w) b/ n我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子  d/ Q  c0 F/ x0 h# z. E1 t' O5 i5 j

$ L6 A8 a& [4 B) N恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

gsg040222

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效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点