关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

gsg040222

如何才能更好的加液，分层更好，还有就是离心完后如何才能更好的吸取白层？

筱筠

离心后弃掉血浆层，用和红细胞等量的D-PBS混匀红细胞。缓慢的加入淋巴分离液中，注意淋巴分离液使用温度20加减2摄氏度。离心时离心机条件慢加慢减。吸取白膜层时，移液管在白膜层液面上，慢速环绕吸取。

jiuxuya

回复 edwardellen 的帖子8 t4 R& }' B+ d6 ?- t- f

% h1 K- P4 D3 U* n9 v0 m请问有网址吗？想去看看淘宝搜不到。。。

edwardellen

买专用的分离管，现在进口国产的都有，省时省力

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）
: \' G8 |' Z; i" M" b$ `2重悬混匀（不能有团块）4 S& w8 Y) F+ y$ ^* _" J5 c
3血液与分离液比例1:11 F1 A+ Q$ R! O
4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降* X' S/ O9 \$ c- U; f& f
5离心升10降19,600G
  Y6 k- K, c! u* t6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。
. I- `+ m/ O! q) q% `% O/ H7 B7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体0 N% t8 l% W# \! |$ }* U
8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min
# L/ i7 ~% Z, I! x* L  o% P6 j9培养5 Y' p( I- C5 Y
我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子
( q1 Y: e: Z. _1 Z: m; Q* V7 t
: `/ b; F0 U1 y7 `恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子" V* \7 K  o& ?! J+ g

+ T4 }# o; g/ U7 D  @效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点