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最近看到几个战友配制脂肪诱导剂也同样和我经历了很多棘手的问题。这些小问题，有时候造成大麻烦。说说我的一些不成熟想法。* ^9 c# p' @! {* }
1.首先确定各组分的浓度，各文献报道不一，并且有的还存在错误。所以最好根据权威文献来计算。我上面的回帖胰岛素用10微克/毫升，在我的实验中效果并不是很好。实际上大多数是10微摩尔/毫升。! ], J+ V1 F& _2 b8 o& n1 C, V/ ]; }
2.确定浓度后，理论上成脂肪诱导是很成熟的方案。但觉得还是要做好调整浓度的准备。就是比如对于胰岛素，地塞米松这样的活性物质，每个厂家，每个批次的产品，质量与“比活性”，或许有出入吧，所以实验室老师也建议，要做几个浓度梯度。比如胰岛素就准备了5毫摩尔，10毫摩尔，15毫摩尔的浓度。4 h, d+ z) o% T* p
- ^* s+ l/ {" T! L" w故配制的时候，就每份分装为500毫摩尔----够加入100毫升培养基。$ y% ^+ X9 h( }$ J, Z
如果打算做最高浓度为15毫摩尔，那么就要加三份分装好的，----这里的总共的盐酸对于培养基pH影响就要去测试。----由此估算母液要多少浓度
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3 T. l$ C* ]6 n* H+ C% W因为要过滤，浓度又不能太高导致母液总量小，会损耗太多。也有的人先加入培养基再一起过滤，这是另一种方法，但还是要先用特定溶剂溶解好再加入。
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- |2 t6 U& F( A# }$ L, C4 k0 x对于要不要过滤，有战友提出争议，在超净台内称量的话，对于未开封的非分装的试剂是否是无菌的呢？有人说可以，有位版主认为不行。如果不需要过滤那可是很好的，母液尽可以配浓一点。 b6 z. r9 L; r3 H; [4 l
我怕万一污染都一一过滤，感觉那个小滤器过5毫升就损失了0.5毫升。
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2.对于溶剂的浓度对实验的影响，一直没有找到权威说法。希望有战友提供。---对这里的实验而言。# K+ @5 s E4 F6 @: P2 Z: B' s
/ v- @4 P! |( [" ~: _, z+ J3.关于用临床用的药物的问题。经总结如下：
) T9 L% p) _5 f# M# T9 _8 l胰岛素：% G1 u6 m0 U9 x; E' O1 g
胰岛素种类：3 [" @; g& o* Z% A: \' t! M5 k* |9 {5 D: e
按来源：1、动物胰岛素：
. T z8 N% ?0 a短效胰岛素（普通胰岛素）：400单位/支- x- r; `) q1 n$ L/ O k
长效胰岛素（鱼精蛋白锌胰岛素）：400单位/支% m! G/ q7 i4 g* u+ ~0 f1 E; E
人胰岛素：分为二个厂家生产：
- c" m! w1 B! J. y4 K美国礼来公司…………优泌林
: y A7 q7 z7 v1 l丹麦诺和诺德公司……诺和灵: |. G5 c# D) A) b, B1 Z) ~$ w/ @/ Q
优泌林：% D: v, t7 m8 W
瓶装剂型：400单位/支，
- r* P; W- }6 U4 U q3 u常规优泌林（短效）% D. p% D! z% L7 j; h6 ?
中效优泌林（中效）5 I$ n4 Z$ k( ]$ X
优泌林70/30（预混30％短效、70％中效）
5 V4 w0 e' _% s: S) b7 w诺和灵：2 k, w) f+ `6 ?0 [) g" G- j
瓶装剂型：400单位/支，
- j6 t6 Q% y2 q7 s5 b' R7 {! @诺和灵R(短效)
1 e6 g/ N: p$ B" T诺和灵N（中效）
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有人认为可以使用临床的，但至少国外文献很少见到用临床药物的。# `; \9 C- X* N. V# y" Y$ o+ k
关于质量单位和国际单位的换算：战友提供
( u1 M9 }# d7 z! V" ]- E4 o有些药物如维生素、激素、抗生素、抗毒素类生物制品等，它们的化学成分不恒定或至今还不能用理化方法检定其质量规格，往往采用生物实验方法并与标准品加以比较来检定其效价。通过这种生物检定，具有一定生物效能的最小效价单元就叫"单位"(U)；经由国际协商规定出的标准单位，称为"国际单位"(IU)。国际标准品主要是供给各国来建立和标化自己的国家标准品。对于还没有建立国际标准品的药物可以由本国制订国家标准品。
6 K* s0 W- ^4 d3 r' F* f4 A一个"单位"或一个"国际单位"可以有其相应的重量，但有时也较难确定。单位与重量的换算在不同的药物是各不相同的。1931年国际联盟卫生组织的维生素委员会，首先规定了各种维生素的国际单位；如每1个国际单位的维生素A相当于0.3微克，若是它的乙酸盐则为0.344微克，维生素P相当于O.025微克，维生素E相当于1毫克等等。虽然许***生素现今已改为重量表示，但维生素A和D仍然沿用国际单位。
; h7 Y# I+ H3 p3 B+ I5 C各种激素1国际单位折合国际标准制剂的重量为：黄体酮1毫克、绒毛膜促性腺素O.1毫克、垂体后叶激素0.5毫克、催乳激素0.1毫克、胰岛素45.4微克。
# Q0 A0 U) h; R: s/ \! X! P抗毒素的效价检定，通常是以能中和100单位毒素的量，作为一个抗毒素单位。
$ a* g2 w5 A! Z( U/ x$ Q抗生素多半用单位表示其效价，随着科学研究和工业的发展，它们的化学结构也逐步明确，它们的含量可用理化检定方法表示它的有效成分的重量，所以目前也较多地采用重量表示了。3 W/ ]8 X; P8 I9 C/ F+ a6 \
http://www.mofcom.gov.cn/article/200311/20031100142853_1.xml5 k+ y4 ]: @3 s% v7 R" ^
中勉强有科学技术部、外经贸部、财政部、国家税务总局、海关总署关于发布2003版《中国高新技术产品出口目录》的通知4 z. T5 g" M" e2 d2 q9 L+ W
好像提到“293 30043100 重组人胰岛素原料粉 白色结晶粉末，利用重组DNA技术和基因 5 技术生产胰岛素，纯度达到99％，效价> 27．5单位／毫克，主要用于治疗糖尿病。序号 海关商品编号 产 品 名 称 描 述 技术领域 294 30043100 重组人胰岛素注射液 无色透明液体，利用重 DNA技术和基因 5技术生产胰岛素，纯度达到99％，效价> 27．6单位／毫克，主要用于治疗糖尿病。”
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: L9 [* o5 a. k% i, a9 V3 g. G另：这里所说的胰岛素是否会因生产厂家和生产工艺有所不同呢？1 l6 q( t2 F, {' H' V* c/ `
http://www.clinet.com.cn/download/bsb2004/69.htm* g1 T. F0 V& p: q
一个国际单位相当于35微克（诺和诺德公司的）。4 M9 a, A9 ^* y r e1 e- h5 w* V
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故，用试剂公司的比较省事点。% ?& I a8 U9 U, ]5 t
+ _# n/ M% c# x2 t* Y地塞米松：3 f4 v( P7 Z, M F* I
临床多用地塞米松磷酸钠。很便宜。但我几乎很少看到有文献说用这个药的。
, U, _& K/ s4 n& x/ ?针剂地塞米松磷酸钠分子量是516.41,配制地塞米松磷酸钠1m mol/L贮存液50ml4 C+ {/ W% f# P9 }' }1 d- ~3 f4 k
地塞米松磷酸钠分子量:516.41, 5mg/ml (9.68X10-3mol/L )，
* W6 R3 H3 l& ]. F m3 ^4 t0 y计算:9.68× 10-3 × X=10-3 ×0.05，得 X =5.16m1
( O2 l' m) M5 B9 S; Y( B: u取9.68× 10-3mol/L的DEX 5.16ml，加灭菌蒸馏水至50ml，即得1mmol/L的地塞米松了。
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]& a/ [5 p* [' I& |+ Q3.配制溶液对于经费拮据的人很重要，所以分装很重要，无论是各个配制分装还是加到培养基里，都要分装好冷冻。但是对于实际保存时间，说法不一。
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4.每个人都有自己的小经验，希望能拿出来和大家分享。做各种诱导，都涉及到添加因子的配制，希望这个板块能形成一个方便实用科学的关于这个知识的帖子。还有各种生长因子的配制等等。期待战友灌水。 |
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发表于 2009-8-4 12:05
