第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

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0 C. M$ W. m, i' C5 c第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞1 b8 W3 Y) y1 @; }4 C, D

  Q! ]2 A% Y1 U1 Z: x- `

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3 S* B3 p4 D% T; y9 H不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：# ?. C/ e! w# v% X4 l$ I1 y; @

  k5 n) |& X6 |: f实验前准备：
8 Z% @$ h& R/ M8 T; n+ f. O（1）DMEM+10%FBS" h/ p1 O+ j% k% ~
（2）PBS
% S5 R* o$ V1 F9 l+ u0 N+ r（3）0.25%胰酶
/ n7 k# d; O( S3 w4 a  M2 b6 @（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）
- q4 \( M( s: \, O
! ?% a6 E1 s; l实验步骤：
( Z: c% H' ?. Y2 _( i/ z（1）弃去T75瓶中的原液。* O% I% i7 W: }' Q& N$ z) k
（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。
7 U# [) K- B7 s: O8 q1 A（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。2 i; o3 F9 c9 p2 a9 S" h. s. i3 f
（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。+ B. F" R- B5 }' ?, j2 `
（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。
6 F# m$ q  _3 {$ _  i（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。+ W4 V7 N. d9 v2 p; n2 H6 \. H) X  `
（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。
$ S( r9 h8 d2 {（8）放入温箱培养。
5 Y$ @& A' q  b( l( n6 G/ V, W. q(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？1 [# s4 y# Q4 J* r6 i; c
一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：0 _, L9 Y( w& h3 I
这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1
6 ^, A7 e" Y" Z& @8 j把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！