第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

泡沫清风

5 L& \, ~! p! w8 C* i
: }0 Q! @* G' v- h0 V9 H
铺皿后19小时左右，观察细胞密度：' }1 ^1 v7 o2 }# e) |

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! c* b, Q+ q3 z8 o  \
1 {& [9 J- f0 p" t7 `+ B
实验准备：
( Y4 d, Y, Q& D$ Z1、培养基：DMEM+10%FBS; D. {* X8 c3 P: w2 a
2、lipofectamine 2000 （invitrogen）
, v" R" I1 k- w, Y3、OPTI-MEM （GIBCO）
! O1 z, R5 z7 r' ?% A+ Z( \4、质粒
/ F1 X- X! T; [+ r& i  E   两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP5 K8 o5 ~/ j) _* Q8 i6 W
                        MSCV-IRES-GFP
3 P: C! f  L0 s$ e( Y) Z. H    两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG" c+ x3 w+ e  r$ P

" Z. j# C$ u' c  ]实验步骤：
# M9 D  @! D0 i- n( T1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。& N- R0 b- A8 R3 ]+ s
2、制备质粒-lipo 2000混合液：
! _& P) U2 ~3 d6 K2 {/ s（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）) z. r+ E, a9 y) g! |% H2 x6 T

5 D7 n2 ^1 m! G4 S8 z& H  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）
2 H" q9 k) E4 Z" K   （b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）
  e# C2 @9 N0 p) D  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。 （4个皿的量）/ T0 L7 T" S! G7 }( T8 @
  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min
- B2 N3 j4 F+ W) n$ E3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。- f& J& K# E! B7 O, b
4、放入温箱培养，到6小时时换液。

轩辕之客

沙发！！！

细胞海洋

图片很清晰，内容很详细，谢谢

mvirus008

see see

john8707

期待啊~

biowx

hualin840518

hualin840518

cortex

xiexie

chenghoby

老师辛苦了