全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的骨髓间充质干细胞,问题可能出在哪呢？

zlz2626

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第五天的  全骨髓提取法

zlz2626

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉MSC  不是很多  其他细胞到不少     ！！; H" v7 X' t! r/ ^0 i
这个是我同时用PERCOLL  密度梯度法  一起做的   结果密度梯度法 提的细胞就是不贴壁  可用全骨髓提的道长了    因为我后期的实验对细胞的纯度要求很高   我怕全骨髓提的达不到我的要求      
9 o$ s# z; e4 r6 Z" v* G2 d4 e密度梯度法细胞不贴壁的原因我分析了下可能有以下几点  
, o9 {( X" e: Z: W5 S1.就是PERCOLL  的浓度  我用的是1.077的  体积分数60%   难道是浓度不可以
% ~9 O) a7 W7 ^0 Y/ C3 E0 q2.就是离心这歩  我是2500转  25分钟   有没有可能对细胞造成损害不贴壁呢？$ q/ K/ U( Y- C* V1 u
3.就是培养体系  我的培养基可能有问题  我用的是L-DMEM  加的10%的FBS 。不过全骨髓的 我也是用的相同的培养基  就长出来了  ' ^  P! @  B8 f
   暂时就能想到这么多了   那位战友 能帮忙分析下  问题可能出在哪呢？

饶冠华

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- f( Y# k1 n) d# T8 z  J9 T图片看上去怎么这么怪啊？ 为什么要用绿色背景啊？ 好难看~~  你为什么说觉得MSC很少呢？仅仅凭目测吗？还是你有染过MSC的marker??   你觉得那里面都有什么其他杂细胞呢？ 有没有依据？
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) e! `9 o% X, O5 U0 f这张图片看不太清楚，建议你用倒置相差显微镜照明场 再发上来看看

zlz2626

3# 饶冠华 : ^* B/ c2 E* g" X) C  ^' p7 ^

7 J" a' @  Z+ G5 A$ k' ^: x. s: ^
& A' X4 U1 Q7 D还没做检查 ，我让我们实验室的一个老师帮忙看了下  她说从形态上看 有BMSC  具体她也说不清    我也是头一次见到我养的东西  所以我也不知道  想请战友们帮忙看下了   其实用全骨髓法提也是战友们的建议  我就试了下  我原本是想用密度梯度法提的 可密度梯度法 没有出结果  而全骨髓法到长出来了  就是上面这张图   ' A) d" l; C. W. B, ?9 p9 K3 G. }9 w
至于为什么用绿色   呵呵  因为我们的实验室的倒置显微镜就只有绿光的  所以就用了

饶冠华

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3 C3 d; q, \( Z3 I4# zlz2626
' {* V! Z: X  a5 c3 {" v/ M( K不可能吧，所有显微镜都有明场啊  你把滤光片调到没有颜色的那个档位  你去问问你们师兄师姐吧! P1 x* h! s* n) q& o
另外，你把细胞传1~2代  杂细胞就应该会消失的.  另外建议你搜索几张MSC的图片看看，就心里有底了
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li-baby

密度梯度法细胞不贴壁，离心转速有点高吧，我们是1800转还算可以。

zlz2626

5# 饶冠华
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# c! e+ N  ^. a8 c' K# B" @4 H6 f1 I7 c  \' I, U0 M, y
谢谢了  我试试

zlz2626

6# li-baby % H! u: E( c. @8 u5 T

, B# q; g5 l4 u" r& {
2 j' X' [# L7 n% ]% H能把你的整个过程详细说下嘛  包括PERCOLL的配制 ， 十分感谢

02402122

我不建议使用PERCOLL
. i( Y# Y+ k& q  A* M, M* Z* M! F$ d全骨髓贴壁就满好的
* ~8 e( N5 A3 K7 a当然这是我的意见; ]3 ?4 t. b( |3 f* ]5 w8 r  o/ X
传三至四代细胞就能纯化很多
$ p6 C2 r! Q4 p) I- @* `6 I8 J& d不行做个鉴定吧

凤仪飘雪

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉 ...
0 [$ L4 m3 I4 v% W! yzlz2626 发表于 2009-8-24 19:07

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+ f1 s+ @5 [& u, J( h9 K8 v7 s4 x2 l, o9 m# |( a( ?
    percoll应该用1073的才对吧？还有转速的确太高了，我平常都用1200~1500就足以分层了，20min就可以。不过经过比较我还是觉得全骨髓法效果比较好，用分离液细胞生长非常慢而且状态也不好。