小鼠囊胚细胞差异染色方法

大猪小猪落玉盘

$ r$ r3 ^7 n& a8 B- `! E) y4 L* }# i7 U( ^5 Y& z, ~( [) I
希望大家一起进步

抹茶跑跑

感谢版主的无私分享

抹茶跑跑

* |& P$ {$ O, O9 K3 W8 V7 p% M( P  w
' y6 E  v) C1 t3 P* Y, X有一个疑问，豚鼠补体（sigma）是冻干粉" n2 C: T) G! R8 _8 B  f
“1:10 稀释的豚鼠补体(guinea pig complement) :将1 份体积豚鼠补体和9 份0.1% PVA 的PBS相混合”
$ H! |8 r5 p/ N7 i* `' m# w这里提到的一份体积豚鼠补体，是指冻干粉溶解之后配成的液体吗，豚鼠补体冻干粉标明的是5ml装，冻干粉不是mg而是ml吗？是指要先用5ml液体把冻干粉配成5ml豚鼠补体溶液？, y" ^, @# @2 }5 u" b( i5 D! c1 l
那么冻干粉是用什么溶解呢
0 H( t3 o5 r, y' h" Q9 w* ^# r; {
冻干粉是怎么配的，一份体积指的是什么，有点糊涂

大猪小猪落玉盘

你说得很对，是要首先配成溶液。我记得我是用PBS稀释的，但我现在不能确定。我记得当时我是按照说明书配的。如果你购买了试剂，应该有说明书，上面一定会告诉你怎么配成溶液的。另附一张我自己做的图片。另外，再给你几篇相关的文章，有论文也有方法，你自己多参考，祝你实验顺利！
# W! m" L3 U8 T3 u6 [* z2 Q( ?9 j8 _( Z5 s7 y+ z" _1 U( r8 Y. B& |
  e, F' X  N* d/ d5 b
[hide][/hide]

抹茶跑跑

7 z3 U$ _6 Z; H! n

6 M4 m3 K  Q- ?. }" a many thanks

抹茶跑跑

; v% V( {9 U3 Y0 M+ |6 ~2 |. p+ \- `* L2 f
之前查过豚鼠补体的说明书（sigma），但是没有找到具体的配置方法，请高手帮忙看下，谢谢

抹茶跑跑

- x% W- `) e7 c& O

& L1 _4 p9 P6 R6 {/ e看了版主的文献，很有帮助
% v; Y- p2 m% K7 a: f还有些细节，没有找到答案
- K% T* c1 [: D% g/ L- g1.0.5%的链霉蛋白酶，PBS配置后过滤分装1 @( }- x, W, O5 m; F8 m# ^
  配液用的PBS，是调好的PBS直接可以用，还是需要用灭菌PBS，配好备用的PVA-PBS还需要灭菌再用吗；过滤分装的具体操作是什么样的，0.22微米的滤器过滤吗？9 s* x+ V- z. U8 d( ^5 U: ]- p

1 W2 y- v; D. ?1 J3 p2.胚胎放入抗血清中作用后，用于终止抗体反应的10%血清的PVA-PBS，是指10%豚鼠补体吗？PVA-PBS洗涤后，再次放入含PI、Hoechest33342的豚鼠补体中吗？$ d- e: z0 d! M2 \& G
. q  ~1 y2 e- R9 c9 o/ Y* C
谢谢前辈的回答

大猪小猪落玉盘

我看用超纯水就可以。祝顺利！

大猪小猪落玉盘

对于第一个问题，最好灭菌处理（自己买盐配的），如果是买的PBS粉末自己配的，过滤器过滤就可以了。不管怎么样，就是保证你实验不受影响就好了。（不灭菌或者过滤也行，一般操作可以，但你是配置溶液，为了长期保存，还是越严格越好）。如果自己实验室没有0.5%的链霉蛋白酶，自己查资料，用实验室的常用盐，自己配个酸性台氏液也可以。但自己要掌握消化透明带的时间。: q) V, l$ {) j
第二个问题：可以不用血清终止反应。但要多洗几遍。但不是用补体。
+ P& e$ Q* j" Q) P最后一步，可以把两种燃料混入补体中，一起作用。也可以跟补体分开作用。也有人先用PI同补体一起混着用，然后再单独用H33342作用5分钟。以我个人经验，几种方法都可以。

张也行

谢谢各位前辈！