小鼠囊胚细胞差异染色方法

大猪小猪落玉盘

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7 x2 |& J+ L- {7 L( d. }/ C' B希望大家一起进步

抹茶跑跑

感谢版主的无私分享

抹茶跑跑

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& {  J9 M+ k! b$ v5 p- Z5 O有一个疑问，豚鼠补体（sigma）是冻干粉
* i+ h# c5 u; u“1:10 稀释的豚鼠补体(guinea pig complement) :将1 份体积豚鼠补体和9 份0.1% PVA 的PBS相混合”7 s! Q9 F: }5 n! \- I& M1 s
这里提到的一份体积豚鼠补体，是指冻干粉溶解之后配成的液体吗，豚鼠补体冻干粉标明的是5ml装，冻干粉不是mg而是ml吗？是指要先用5ml液体把冻干粉配成5ml豚鼠补体溶液？
! I+ r% ^8 g9 ^( F* @2 g4 \( U/ ]那么冻干粉是用什么溶解呢
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0 h, s5 Z% r& b: Z* g9 @( [2 T冻干粉是怎么配的，一份体积指的是什么，有点糊涂

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你说得很对，是要首先配成溶液。我记得我是用PBS稀释的，但我现在不能确定。我记得当时我是按照说明书配的。如果你购买了试剂，应该有说明书，上面一定会告诉你怎么配成溶液的。另附一张我自己做的图片。另外，再给你几篇相关的文章，有论文也有方法，你自己多参考，祝你实验顺利！
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抹茶跑跑

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6 d( J; c( V+ A- N9 M/ T9 m many thanks

抹茶跑跑

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之前查过豚鼠补体的说明书（sigma），但是没有找到具体的配置方法，请高手帮忙看下，谢谢

抹茶跑跑

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看了版主的文献，很有帮助0 ~% z+ F8 K+ K  W, _; l$ Y
还有些细节，没有找到答案- c  i- z) |, t2 @
1.0.5%的链霉蛋白酶，PBS配置后过滤分装* o( E. J# A; O3 A$ V% C9 F5 c" @0 C
  配液用的PBS，是调好的PBS直接可以用，还是需要用灭菌PBS，配好备用的PVA-PBS还需要灭菌再用吗；过滤分装的具体操作是什么样的，0.22微米的滤器过滤吗？  d% I0 G3 K2 e% R" H& i. k& D% ~7 j

; |! c0 I# d9 Y* d' \- j, w0 [2.胚胎放入抗血清中作用后，用于终止抗体反应的10%血清的PVA-PBS，是指10%豚鼠补体吗？PVA-PBS洗涤后，再次放入含PI、Hoechest33342的豚鼠补体中吗？
1 l- k. L) ]/ J* R0 K* M/ @- V. `- t) L. `5 m' T
谢谢前辈的回答

大猪小猪落玉盘

我看用超纯水就可以。祝顺利！

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对于第一个问题，最好灭菌处理（自己买盐配的），如果是买的PBS粉末自己配的，过滤器过滤就可以了。不管怎么样，就是保证你实验不受影响就好了。（不灭菌或者过滤也行，一般操作可以，但你是配置溶液，为了长期保存，还是越严格越好）。如果自己实验室没有0.5%的链霉蛋白酶，自己查资料，用实验室的常用盐，自己配个酸性台氏液也可以。但自己要掌握消化透明带的时间。& V2 D( @* H# s+ {9 z& D
第二个问题：可以不用血清终止反应。但要多洗几遍。但不是用补体。; {2 M% x2 l: i2 e4 N/ O: R# O! V
最后一步，可以把两种燃料混入补体中，一起作用。也可以跟补体分开作用。也有人先用PI同补体一起混着用，然后再单独用H33342作用5分钟。以我个人经验，几种方法都可以。

张也行

谢谢各位前辈！