求助：SD大鼠神经干细胞流式检测！！

xialiguang

各位前辈大师好; a* x& @: @( ?2 R& {9 T3 R
我做的是SD大鼠的神经干细胞
1 N" Z% l' U  t5 Y5 y1 j$ k干细胞养的都还不错; X/ u+ A! e0 {( U& d1 J: S) g
需要流式检查四种胞浆抗原（产生四种神经递质的酶）
; Y1 |  R3 ?& |! O5 T4 @  `现在遇到的问题是：1.神经干细胞的流式参数如何设置？跟常规的人血液标本相比需要注意哪些事项？1 n: j- r3 J. C+ b; _0 c
                  2.SD大鼠的神经干细胞是否比常规一般的人血液中的淋巴细胞要小？（个人感觉是要小？但是具体怎样需要大家指点！）
1 ~4 g6 Y! V# X2 |! S: P                  3.如何避免使神经干细胞在制作单细胞悬液时细胞碎片少点而且单细胞效果也要好点？. f7 ?% H- ~; V
迫切需要大家的回复！！！
! w' k) H7 O+ M/ H, f9 W谢谢大家！！

青萍红檀

回复 SWY 的帖子7 f; d2 ]" \& U6 }0 F+ p; O

7 [  F8 w* t, O5 c9 l谢谢！

SWY

原则上只要抗原在细胞膜内，做流式加抗体之前都应该给膜打孔或者破膜，否则抗体进不去。

细胞海洋

回复 青萍红檀 的帖子4 B1 h; j& F' R; H' a1 H

6 q& f7 ~, k& U# Y, d建议你发新帖提问

青萍红檀

回复 ygplay 的帖子' P2 [, _: ^$ e5 O0 a9 Z5 i

$ w( t: l, @- ~1 g你好，我想问一下：1、做神经干细胞的流式检测nestin时，在加抗体之前需要破膜吗？" g6 X' s+ k* a; ?( q  s
                                2、孵育是在4°还是37°好点？谢谢
( |+ z1 Q! L. \7 N% {8 ]8 }

ygplay

补3、也可以试用胃蛋白酶消化，浓度低一点，时间短一点。

ygplay

1、流式细胞仪应该有相应的参数；6 `! p% N4 Q' v
2、SD大鼠的神经干细胞是比常规一般的人血液中的淋巴细胞要小；: K( x0 H8 u$ y8 v/ M/ H2 i
3、如果神经细胞是从大鼠脑组织提取的原代细胞培养，建议你在制作细胞悬液时，用玻管而不用胰酶和EDTA。采用机械法提取：把玻管烧成不同孔径，由大到小分4次，冰上沉淀5分钟然后把上清转移到第二支管。
7 I5 e' g2 J# {$ ]   做细胞培养手要轻要快，组织打入悬浮管时要保持30°角，轻轻推入，转数不能超过1200epm/5分钟（细胞处在界面肯定会破碎）

luckydog

没做过，学习中

jennyshy

流式检测一抗是不是最好带荧光啊，这样减少步骤

xialiguang

谢谢！斑竹