求流式细胞 cd34 cd90 操作

slong

步骤要详细 我是第一次做 希望高手 解答

cartoonyang

为何没有回答？我也需要知道，因为我马上要开始做干细胞表面抗原的检测，用FACS。

kqyy

2个标记够吗

yuheng

分为一步法还二步法，不清楚你的抗体选择什么的？

yuheng

这里有一般步骤，可以参考下：  Z9 o) o- N0 i1 N: Y
制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、& ]. e' _* u$ C- }: w: k
　　　　　胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法)
; O: o/ M: P4 v  J8 z" M* }! F　　　　　　　　　　　　　　　　　↓. L. `$ l& s( p/ P* c- _+ F1 I
　　　　　　　　　用10％FCS　RPMI1640调整细胞浓度为6 I6 H& Y% l; I  {& u
　　　　　　　　　5×106～１×107／ml7 ]  X# _! `1 M, q
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
( A; [; V" d8 }+ a% b4 i　　　　　　　　取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl)& D- c: @8 X- w3 e% H
　　　　　　　　的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1∶20(用DPBS
3 {+ V& t2 J2 P3 O　　　　　　　　稀释)灭活正常兔血清+ A" T2 s3 X6 m; H0 O$ U6 J% w' k
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓4℃ 30min# m; u' K: U. |! N( T
　　　　　　　　用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右* L* ]3 B% J" K' K/ R  |; W8 }
　　　　　　　　　　　　　　1000rpm×5min6 k& F8 }- i1 Q5 [/ _# A
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
3 y; v9 t; R( O* y　　　　　　　　　弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠( h" U3 l/ P. e! [2 ~
　　　　　　　　　(或兔抗鼠)荧光标记物，充分振摇. J! H8 D4 h' ^5 q0 x$ r
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓　4℃ 30min
$ H5 B8 L- `3 F1 J6 o' k　　　　　　　　　用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右' [  \3 t+ P; T
　　　　　　　　　　　　　　1000rpm×5min5 X7 V: j" q8 P5 n! u5 v. u
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
4 d1 D2 q0 H9 p' C4 B　　　　　　　　　加适量固定液(如为FCM制备标本，一般加入
. n- J8 J2 c" l/ S$ J　　　　　　　　　1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，3 ?$ g6 w" m% i" _9 k3 ?& q
　　　　　　　　　视细胞浓度加入100～500μl固定液)
8 y! F. ?( W: K/ ]4 f8 q　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
4 n+ K3 S$ h3 A5 ]　　　　　　　　　FCM检测或制片后荧光显微镜下观察  Y! i8 F/ C5 j' b: v9 _
　　　　　　　　　　(标本在试管中可保存5～7天)

slong

谢谢

mag2722

谢谢

helenkim

学习了，谢谢分享!

nhzxcsc

我来分享一下我的步骤吧：
" {( \' h3 v& J! W8 h1、        细胞消化。# g) f! t8 D, Q* n
2、        PBS洗涤2次后，重悬于含有1%FBS和0.1%叠氮钠的PBS中，制备成5×105/100UL细胞悬液。: L. o: a. m! ^. |% E
3、        依次添加**抗体，避光4℃孵育30-45分钟。0 J$ G$ |" Z! J/ r* f+ x
4、        1500rpm离心5min去除抗体，添加PBS洗涤2次‘
( I$ G/ Z" v) s: i( Q8 T+ ?, u5、        添加适量PBS重悬后上机，对于每个样本至少计数1×104，数据采用FlowJo软件分析。

brian111

都半年了，还没沉啊。。。结果怎么样？分享一下吧~