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ligangcw

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楼主

发表于 2010-1-29 12:32 |只看该作者 |正序浏览 |打印

细胞转染要注意的问题欢迎大家讨论

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zhengds

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10楼

发表于 2010-6-17 17:00 |只看该作者

个人认为: z' @% X9 Y/ t7 H/ U& g
1：首先要对自己要转染的细胞做一个G418的抗性标准曲线，找到合适的浓度，不要直接拿别人的药物浓度，很多都是不适用的，特别是文章里的，不要信，要针对自己的细胞自己摸一个，事半功倍。
2：对于细胞系的选择，要尽量多搞几个不同的细胞系，我们做同源重组，有的细胞系就是不出阳性的，有的就很容易，所以有可能是不同细胞之间的微小的差别造成实验失败，一定不要拿一个细胞死做，可能会死的很惨
3:转染的质粒多做几个不同的浓度/ Z. h5 ^0 `- [0 l# b7 p
4，转染前细胞一定要长到80%汇合

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hljzyydx

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9楼

发表于 2010-5-9 20:26 |只看该作者

要注意的问题很多啊。。: Z! O1 ~: a4 d) T; i
第一：转染试剂的选择（现在最常用的应该就是Lipo2000；当然，如果是电转或者其他方法就另说了）不同的转染试剂的转染效率和要求是不一样的，比如转染前培养液中是否可以含有双抗等。也可以视你的实验要求，选择特定的转染试剂
第二：转染时对照的设定，转染是一种可以拿到直接数据的实验，所以对照的设定必须严格，我一般设阴性，阳性和空白对照，这也是要视具体实验而定的
第三：转染条件的摸索，转染试剂说明书上给定的条件不一定适合你的实验，所以实验前一般要自己摸条件，找出最佳转染条件，这个是必须的
第四：污染的控制，这个无需多言，细胞实验都是要注意的，但转染更应注意，原因很简单，试剂很贵，因为这个影响了结果的话，冤死。
! N$ M' {$ o- `/ N
大概就这些吧，其他的可能还有一些细节，想起来了再补充，希望对你有帮助