细胞转染要注意的问题

ligangcw

细胞转染要注意的问题欢迎大家讨论

liugy04@163.com

也打算做RNAi的细胞转染，用电转和脂质体的较多，持续关注

细胞海洋

利用搜索 “转染” 在论坛有很多这方面的帖子 看看有没有帮助

ligangcw

尤其稳定转染及筛选，我搞了几个月了一点进展也没有，还望不吝赐教！

icesnow

楼主是遇到了什么问题了，我也在坐干细胞稳定转染，用的慢病毒，有问题可以一起讨论

ligangcw

转染之后六到七天细胞就死光光了，根本不用等到十四天的单克隆出现

ahua

jiayou，细胞转染很棘手，望有经验者不吝赐教。谢谢

cony

关注，我也要做转染

hljzyydx

要注意的问题很多啊。。! v+ `3 o# K4 Q3 A! k, u( x$ k
第一：转染试剂的选择（现在最常用的应该就是Lipo2000；当然，如果是电转或者其他方法就另说了）不同的转染试剂的转染效率和要求是不一样的，比如转染前培养液中是否可以含有双抗等。也可以视你的实验要求，选择特定的转染试剂1 H, g/ S; g6 P( G, Z- J) ?
第二：转染时对照的设定，转染是一种可以拿到直接数据的实验，所以对照的设定必须严格，我一般设阴性，阳性和空白对照，这也是要视具体实验而定的
& z! E/ f# Q, F& t- B) v0 T第三：转染条件的摸索，转染试剂说明书上给定的条件不一定适合你的实验，所以实验前一般要自己摸条件，找出最佳转染条件，这个是必须的
) E" O  j6 C; [( c( h- ]第四：污染的控制，这个无需多言，细胞实验都是要注意的，但转染更应注意，原因很简单，试剂很贵，因为这个影响了结果的话，冤死。5 l" Q$ u' r# C& @# w# E

, D% t7 A* I- k9 B- C大概就这些吧，其他的可能还有一些细节，想起来了再补充，希望对你有帮助

zhengds

个人认为
0 D2 E$ Q( O  E; \1：首先要对自己要转染的细胞做一个G418的抗性标准曲线，找到合适的浓度，不要直接拿别人的药物浓度，很多都是不适用的，特别是文章里的，不要信，要针对自己的细胞自己摸一个，事半功倍。8 B1 p& y: e) U/ t2 h1 H
2：对于细胞系的选择，要尽量多搞几个不同的细胞系，我们做同源重组，有的细胞系就是不出阳性的，有的就很容易，所以有可能是不同细胞之间的微小的差别造成实验失败，一定不要拿一个细胞死做，可能会死的很惨
3 w2 S' v( D0 b/ U3 r3:转染的质粒多做几个不同的浓度8 k. o& y4 X' a( S
4，转染前细胞一定要长到80%汇合