跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？

guojingjing

跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？我最早开始做NSCs的时候是老板交的，说不能用胰酶消化，NSCs比较脆弱，所以我一直都是机械吹打，每次做实验胳膊都疼的不行，后来受不了拿0.025%的胰酶消化1min就觉得好吹多了。但是不确定对其性质有没有什么改变

luckydog

为什么细胞传代后生长缓慢，是不是跟胰酶消化有关。我们是用0.025%的胰酶+机械吹打。

dulaiyouyu

胰酶效果好像确实差一些。
' L3 i; |# n0 [: w
2 ^9 m; x. _2 m我们实验室是用比较温和的木瓜蛋白酶。

jennyshy

是0.05%，打错了
1 }# a7 h9 o' W& k, S0 l, S
; u5 N: E/ N% N低浓度的好

guojingjing

回复 9# apengforever
* F5 W/ J. ^4 R- @; E: w6 b/ y9 {" o9 `; e# A9 N  x& @
# f6 j" S8 d6 N) O9 }, \
   呵呵，同意楼上观点

apengforever

看来大家手里都挺有货的，呵呵，以后需要各位多多帮助，关于胰酶消化后对神经干的影响，我个人感觉应该会有的，因为每次消化后贴壁分化的细胞会增加，且再成球较难，可以结合消化法和机械吹打法，可以尝试更低的胰酶浓度，如0.01，时间稍长一些。

iseeyou1210

还有一个问题，大家说的机械吹打，是用枪头还是用needle，那种反复吸打？
5 q0 |4 J. H" e, L; y6 k/ y! W( n谢谢！
2 Y& l' F+ E/ ?% X9 K8 l- K因为最近要做这个，干脆来个详细的，最好哪位能给一个详细的protocol。+ k: l8 e: j& h& ?* i: Q
tangliang.li@gmail.com

guojingjing

回复 6# iseeyou1210
" d5 Z% w- G% z( Y0 ]
4 D9 S  ~) a  C6 `; l& |
4 t1 d* K9 F* l5 u3 b9 S# z    这两种胰酶颜色上的差异是因为酸碱指示剂的有无。红色的为加酚红的，无色的没有加，我们一般自己配的胰酶都不加酚红。用这种加了酚红的可以监控PH，但是某些细胞培养不能有酚红

iseeyou1210

we used the trypsin from the invitrogen.5 _2 w$ g% b; w! C- m8 }( `
But they provide the red and white trypsin with the same concentration.! j: m$ D/ p/ c. ]/ X
normally we use the write one for the ES and NSC culture.
* L  Z, v8 g! _8 E0 K) c  ~! n; Qsome people know the difference between these two things？

have-a-rest

( E6 |+ ~& c% o* J" G* Q

胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%T ...
, h8 s$ l# ^# v1 q% O3 Yjennyshy 发表于 2010-3-31 16:41

& k0 `8 C1 C; Q* o9 @$ K# [4 `" R7 ~
0.5%似乎很高浓度哦。应该0.05%，时间可以长一点。消化应该会影响NSC的分化潜能，不妨尝试机械传代。