跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？

guojingjing

跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？我最早开始做NSCs的时候是老板交的，说不能用胰酶消化，NSCs比较脆弱，所以我一直都是机械吹打，每次做实验胳膊都疼的不行，后来受不了拿0.025%的胰酶消化1min就觉得好吹多了。但是不确定对其性质有没有什么改变

luckydog

为什么细胞传代后生长缓慢，是不是跟胰酶消化有关。我们是用0.025%的胰酶+机械吹打。

dulaiyouyu

胰酶效果好像确实差一些。' B* m) J: ]/ e- Q! w0 O: e

& v* |) D3 F- O9 _( x我们实验室是用比较温和的木瓜蛋白酶。

jennyshy

是0.05%，打错了
  f& P, d+ C1 T, g4 D5 }
4 F/ _( Z; C2 W4 v低浓度的好

guojingjing

回复 9# apengforever
! K& p1 l  o# q. b" ^! n3 [, b& w  A5 C
/ v* p. M: E- J3 U5 X
   呵呵，同意楼上观点

apengforever

看来大家手里都挺有货的，呵呵，以后需要各位多多帮助，关于胰酶消化后对神经干的影响，我个人感觉应该会有的，因为每次消化后贴壁分化的细胞会增加，且再成球较难，可以结合消化法和机械吹打法，可以尝试更低的胰酶浓度，如0.01，时间稍长一些。

iseeyou1210

还有一个问题，大家说的机械吹打，是用枪头还是用needle，那种反复吸打？
  f4 ?7 v- l0 @& y8 C& h9 E* w0 e谢谢！/ T9 @8 g; \; l2 R6 K2 @9 J
因为最近要做这个，干脆来个详细的，最好哪位能给一个详细的protocol。9 v( ^) W0 y0 ~. b* {
tangliang.li@gmail.com

guojingjing

回复 6# iseeyou1210 - x) A% \8 q$ _5 L% i  J

7 g8 `, |' d  G3 g
* e8 m  [( i- ?" Z; U& }    这两种胰酶颜色上的差异是因为酸碱指示剂的有无。红色的为加酚红的，无色的没有加，我们一般自己配的胰酶都不加酚红。用这种加了酚红的可以监控PH，但是某些细胞培养不能有酚红

iseeyou1210

we used the trypsin from the invitrogen.
' I: f/ N- N% b( pBut they provide the red and white trypsin with the same concentration.
* ^, G$ f8 L0 n0 Inormally we use the write one for the ES and NSC culture.! S5 o9 g. O7 I* g# @6 D- |" {
some people know the difference between these two things？

have-a-rest

7 n+ [" |* f# ~/ M8 V$ Q

胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%T ...
: ^' u9 P% G) J) e1 v% \5 }; Rjennyshy 发表于 2010-3-31 16:41

0 c: y0 o. C/ j3 _& \) g: G( x) J
7 n9 ?9 F% F3 l, l# B  t0.5%似乎很高浓度哦。应该0.05%，时间可以长一点。消化应该会影响NSC的分化潜能，不妨尝试机械传代。