跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？

guojingjing

跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？我最早开始做NSCs的时候是老板交的，说不能用胰酶消化，NSCs比较脆弱，所以我一直都是机械吹打，每次做实验胳膊都疼的不行，后来受不了拿0.025%的胰酶消化1min就觉得好吹多了。但是不确定对其性质有没有什么改变

lpzhdm

能不能赠送神经干细胞，或者交换

ziyunfei1982

c57 小鼠神经干细胞求交换，你有什么？

jennyshy

胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%Trpsin，时间也要短，我一般用用胰酶消化3min左右再吹打。

have-a-rest

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胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%T ...& Z; x; L+ z, r2 d1 b5 b4 ~
jennyshy 发表于 2010-3-31 16:41

( z' _; k- k7 j# H) _( Q5 j2 K
: s* q' D7 B8 ]+ F0 C: I+ N3 _* p0.5%似乎很高浓度哦。应该0.05%，时间可以长一点。消化应该会影响NSC的分化潜能，不妨尝试机械传代。

iseeyou1210

we used the trypsin from the invitrogen./ W. }3 k' g; B. Q2 }
But they provide the red and white trypsin with the same concentration.0 S6 M2 E( ^- f
normally we use the write one for the ES and NSC culture.$ S$ m$ k6 V3 T
some people know the difference between these two things？

guojingjing

回复 6# iseeyou1210 + C6 O9 O  W! v! P0 M% a: H
8 }6 g" n2 n+ \

3 O+ u! T4 [/ f8 G. t    这两种胰酶颜色上的差异是因为酸碱指示剂的有无。红色的为加酚红的，无色的没有加，我们一般自己配的胰酶都不加酚红。用这种加了酚红的可以监控PH，但是某些细胞培养不能有酚红

iseeyou1210

还有一个问题，大家说的机械吹打，是用枪头还是用needle，那种反复吸打？
. |3 s0 [$ g6 J" B0 O/ g谢谢！
$ r) _! ]( c8 U2 B1 Q因为最近要做这个，干脆来个详细的，最好哪位能给一个详细的protocol。
3 q4 z8 l! C4 r) stangliang.li@gmail.com

apengforever

看来大家手里都挺有货的，呵呵，以后需要各位多多帮助，关于胰酶消化后对神经干的影响，我个人感觉应该会有的，因为每次消化后贴壁分化的细胞会增加，且再成球较难，可以结合消化法和机械吹打法，可以尝试更低的胰酶浓度，如0.01，时间稍长一些。

guojingjing

回复 9# apengforever
3 G* E# w6 g' _
* ~1 w' i9 C  H$ u4 \: a% f; ^' C. U/ S3 N7 t/ w
   呵呵，同意楼上观点