跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？

guojingjing

跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？我最早开始做NSCs的时候是老板交的，说不能用胰酶消化，NSCs比较脆弱，所以我一直都是机械吹打，每次做实验胳膊都疼的不行，后来受不了拿0.025%的胰酶消化1min就觉得好吹多了。但是不确定对其性质有没有什么改变

lpzhdm

能不能赠送神经干细胞，或者交换

ziyunfei1982

c57 小鼠神经干细胞求交换，你有什么？

jennyshy

胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%Trpsin，时间也要短，我一般用用胰酶消化3min左右再吹打。

have-a-rest

: A' }& Z' l: q  I- U; G

胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%T ...+ b5 C4 S+ ]$ ?! E& ]
jennyshy 发表于 2010-3-31 16:41

- y: z. l2 [8 k) j
, ^; D* q; l- ^! N$ h) @; T1 _& Z
0.5%似乎很高浓度哦。应该0.05%，时间可以长一点。消化应该会影响NSC的分化潜能，不妨尝试机械传代。

iseeyou1210

we used the trypsin from the invitrogen.
  L7 u- a2 p2 {: t7 c+ G: x, i- @But they provide the red and white trypsin with the same concentration.4 y3 D/ U5 o5 D3 S
normally we use the write one for the ES and NSC culture./ ]( r: c# ^( G. i0 K
some people know the difference between these two things？

guojingjing

回复 6# iseeyou1210 # j" Q6 J- D/ X! }; ~3 p5 A: Y+ L

% B9 D( d/ L; j+ j; g# O; \& t
' ~: C' K9 t+ s    这两种胰酶颜色上的差异是因为酸碱指示剂的有无。红色的为加酚红的，无色的没有加，我们一般自己配的胰酶都不加酚红。用这种加了酚红的可以监控PH，但是某些细胞培养不能有酚红

iseeyou1210

还有一个问题，大家说的机械吹打，是用枪头还是用needle，那种反复吸打？9 o' O4 N+ b  ^% w: _5 A2 A/ r
谢谢！
/ C8 Z- W/ e$ y; t$ Z因为最近要做这个，干脆来个详细的，最好哪位能给一个详细的protocol。4 ]( N+ {/ |' {, Z" |1 L7 E
tangliang.li@gmail.com

apengforever

看来大家手里都挺有货的，呵呵，以后需要各位多多帮助，关于胰酶消化后对神经干的影响，我个人感觉应该会有的，因为每次消化后贴壁分化的细胞会增加，且再成球较难，可以结合消化法和机械吹打法，可以尝试更低的胰酶浓度，如0.01，时间稍长一些。

guojingjing

回复 9# apengforever % _& \, V* L! @- y4 D9 P: X( j
  }# G& B. m" c6 [- l5 B8 r( v
$ ]$ G9 t& p9 z& a
   呵呵，同意楼上观点