跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？

guojingjing

跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？我最早开始做NSCs的时候是老板交的，说不能用胰酶消化，NSCs比较脆弱，所以我一直都是机械吹打，每次做实验胳膊都疼的不行，后来受不了拿0.025%的胰酶消化1min就觉得好吹多了。但是不确定对其性质有没有什么改变

lpzhdm

能不能赠送神经干细胞，或者交换

ziyunfei1982

c57 小鼠神经干细胞求交换，你有什么？

jennyshy

胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%Trpsin，时间也要短，我一般用用胰酶消化3min左右再吹打。

have-a-rest

2 o% F1 t4 z8 H! X. D0 x* P

胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%T ...' `, X2 M1 U2 i# |. c  {- H  X
jennyshy 发表于 2010-3-31 16:41

$ i- P& T/ L' Y# V% e
+ }2 e5 B2 N! f* T3 R) Y3 G" \0.5%似乎很高浓度哦。应该0.05%，时间可以长一点。消化应该会影响NSC的分化潜能，不妨尝试机械传代。

iseeyou1210

we used the trypsin from the invitrogen.  b7 a5 L, M" h) R. M
But they provide the red and white trypsin with the same concentration.
3 |- S0 l8 F. t" R4 f1 J: Lnormally we use the write one for the ES and NSC culture.  K3 @# I; p* P! y3 ?1 v. W  z
some people know the difference between these two things？

guojingjing

回复 6# iseeyou1210
) E0 C! u& v) A' j" C- g/ X5 x1 f' h% m4 X: ]+ I6 k3 f6 B

+ f+ }* H6 k; h# _* s" ~    这两种胰酶颜色上的差异是因为酸碱指示剂的有无。红色的为加酚红的，无色的没有加，我们一般自己配的胰酶都不加酚红。用这种加了酚红的可以监控PH，但是某些细胞培养不能有酚红

iseeyou1210

还有一个问题，大家说的机械吹打，是用枪头还是用needle，那种反复吸打？
3 [, T% ]. `* T* `谢谢！) H0 @+ d' |. E# h
因为最近要做这个，干脆来个详细的，最好哪位能给一个详细的protocol。
1 g7 {- G& o& e/ {/ y1 [tangliang.li@gmail.com

apengforever

看来大家手里都挺有货的，呵呵，以后需要各位多多帮助，关于胰酶消化后对神经干的影响，我个人感觉应该会有的，因为每次消化后贴壁分化的细胞会增加，且再成球较难，可以结合消化法和机械吹打法，可以尝试更低的胰酶浓度，如0.01，时间稍长一些。

guojingjing

回复 9# apengforever
9 b! X4 R' l  x6 N1 Y: E. @/ @6 c1 @
% {! }, S( |( h/ m% B, S
   呵呵，同意楼上观点