小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
1 R, C( v9 r; d. {2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。: g2 T, L+ y! j1 s3 n3 o5 n6 r
3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min  P/ n/ p' l1 }! ^. f& f; Y/ P* x
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
8 a/ `1 g% r) X. a9 z1 P$ X! `- B5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
# D7 s: C. m- V8 @6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。1 B9 |5 I: w' u1 }
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
% C( _, ]0 f9 l8 B此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的& \; K& o5 b  {! h
你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
2 f+ T' ]" ^6 L. `

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006 * r/ G* F3 |) C! h& M

7 ?1 A% C3 L8 r  ?" d
! I) i! M, ^% o) G0 a    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
" X; Q2 b2 V  ^8 q3 u
1 T8 v5 s4 ~, r/ c/ ?& l! _- v1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊( `3 s0 E; A3 i+ G! r

& a) u. s8 i- K; [: e2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。
7 g0 J% y: X; T( @2 t# ?* S9 ?3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
5 P0 u3 L) R: J9 l4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006 ( {8 s. f, Q8 b4 T0 X5 ^0 S

0 z9 d9 w- b( D4 N% j) H
6 W" ?9 q  d. \# C0 W    这是原代细胞吗