小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
) y6 L0 u! s( k2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。+ q, p0 `6 r0 u9 ]9 l* r
3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min0 k8 S3 m# n! [' N
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。$ c' h9 ?4 U7 Y( o) \. o* n
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
# H' a5 v' n3 J/ }% P6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。
2 F4 S0 L" D" J: [今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
% n# @% }3 B# Y) k  M/ s' R此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的. z1 p0 M8 n  g  \/ \( O0 J
你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的4 a, R3 G2 [5 _; ?# L" S' z/ |

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006 : y  ~( b/ f( j* o- N5 A' ]& E

' `8 V/ E4 ]$ v+ Q. F9 J( N$ }% `% v3 f8 E: V4 {- i
    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：# p( ^" i2 f# t

  \* h& A9 T8 w$ `1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
! ~& \7 m7 d. F! L. f7 A: h7 b/ {5 x. U& x. U& G
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。  L& }- I' j0 J
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻6 w/ i6 n% d8 z+ F
4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
6 N# J' G: n9 H: p! I
& M3 R- i2 ]' o" P% a* O3 g0 O8 B/ b
    这是原代细胞吗