小鼠BMSC的原代照片~

angel-sakura

跟下面这个地址的帖子是配套的，为了方便其他人都能看到~故重新开了一个贴~~0 P$ y# ^% E# ]" ~4 Y- H
http://www.stemcell8.cn/thread-19898-1-1.html! f' U- H8 v# l+ _- n) F& |
我是4.20号做的原代，4.23号才开始进行观察，照片如下：
" d9 `5 C* X& g! c  V& j3 A
% x/ r- \$ E2 p( _+ j
; t: Q. S6 J+ R- q* Q4.23号半换液以去除漂浮的杂细胞，4.24观察细胞如下图:# m  S1 p" g; g$ \, o4 u1 ^: C
7 X8 i! K1 e; a! B3 g8 W

: K1 V) v/ q  ]  G8 G0 `- e发现细胞长满大概70%，传代~~但没全部消化下来（用的是0.25%胰蛋白酶无EDTA），大部分细胞仍贴着，时间为2min。
) a' Y+ j1 r( p消化下来的细胞计数为44.75W/ml，有谁养过小鼠BMSC的请指教下此细胞是否是BMSC，感觉此细胞很小~~相比MC3T3-E（前体成骨细胞），此外，我的操作有不当之处还请指出~~谢谢~~

科学家

回复 10# angel-sakura
& F- I9 w- G, ^% L
1 U9 P& k5 q  p- m. }( s
6 D* ]  m. }) l9 Q    没有，加了应该更好哈

angel-sakura

回复 6# 科学家 : t8 P  b0 h9 C6 K. B

! C# z' u! G" h0 D; h请问你的胰蛋白酶加了EDTA没?

angel-sakura

回复 7# 科学家 / @; _. D& ^' R6 R
+ o$ J, M+ D2 X( A" v$ a2 [
不是很贵~

xxzhang83

你这个是原代嘛，肯定很杂，MSC增殖比其他快，传两代后肯定会纯化的。
; ~" Y; G8 {. ^) t! B6 f' H% L5 B可以传代了~~~

科学家

回复 6# 科学家
9 o4 x/ m( c/ i- H. W# F' U% O, e& p, v" K3 G
3T3-E1用的a-DMEM是不是很昂贵呀

科学家

回复 5# angel-sakura
# J" B9 ]# }) ~0 U0 l/ o% C! v2 d
# A! n7 l( G, J. L6 f不会的，你可以试试，8-15分钟，元代细胞本来就难消化，在显微镜下看到细胞变圆了才终止消化

angel-sakura

回复 4# 科学家
9 e) O6 V% r- x2 ], i- z" Q1 [' q
消化时间15min？？？！！那样细胞不都死了吗？

科学家

原代细胞本就会有很多杂细胞的，传过两代杂细胞就少了，细胞纯度就增加了，消化时间一般*-15分钟

angel-sakura

回复 2# jisuyun - o' k* n2 w+ c
我觉得应该不是那个原因，我刚开始养的时候也是有很多红细胞，但之后我有将一个皿中的上清液移到另一个皿中（防止损失未贴壁的BMSC），现在两个皿中的BMSC都长起来了（第2个皿细胞少些），因为HSC等骨髓中的细胞多了也会抑制BMSC的贴壁和分裂（特别是红细胞过多的话沉积在底面使BMSC难以伸出伪足，我去掉一些杂细胞后BMSC就长起来了~~）