小鼠BMSC的原代照片~

angel-sakura

跟下面这个地址的帖子是配套的，为了方便其他人都能看到~故重新开了一个贴~~
" c# Q  w8 k' e% c' z! Uhttp://www.stemcell8.cn/thread-19898-1-1.html
" y/ B7 b! K. o& a& Q" k' r我是4.20号做的原代，4.23号才开始进行观察，照片如下：) F4 ^, w( x$ i3 e% N1 }  I% p- T2 ~: w# G

  O; i$ `; P. A! {0 \
( t6 E6 F$ [0 V) P9 t4.23号半换液以去除漂浮的杂细胞，4.24观察细胞如下图:; H2 j  u5 I2 ^3 E7 z

* R! |: H) ~7 _; A) L) W+ B0 Y* b
发现细胞长满大概70%，传代~~但没全部消化下来（用的是0.25%胰蛋白酶无EDTA），大部分细胞仍贴着，时间为2min。
' x  ]: R6 |1 _! ], U7 @$ Z消化下来的细胞计数为44.75W/ml，有谁养过小鼠BMSC的请指教下此细胞是否是BMSC，感觉此细胞很小~~相比MC3T3-E（前体成骨细胞），此外，我的操作有不当之处还请指出~~谢谢~~

jisuyun

9 G. r) i5 `/ V, R1 q4 z2 |* P0 M% n
好多像MSC的细胞啊 为什么我的里面那么多血细胞？& ~( K* @- V2 {7 w
难道是因为我没有取肱骨？

angel-sakura

回复 2# jisuyun + q' R# w3 Q" Z4 Z0 s
我觉得应该不是那个原因，我刚开始养的时候也是有很多红细胞，但之后我有将一个皿中的上清液移到另一个皿中（防止损失未贴壁的BMSC），现在两个皿中的BMSC都长起来了（第2个皿细胞少些），因为HSC等骨髓中的细胞多了也会抑制BMSC的贴壁和分裂（特别是红细胞过多的话沉积在底面使BMSC难以伸出伪足，我去掉一些杂细胞后BMSC就长起来了~~）

科学家

原代细胞本就会有很多杂细胞的，传过两代杂细胞就少了，细胞纯度就增加了，消化时间一般*-15分钟

angel-sakura

回复 4# 科学家
& q7 N" b7 f/ ]2 H* t7 v: P6 W; N1 U% D
消化时间15min？？？！！那样细胞不都死了吗？

科学家

回复 5# angel-sakura
  L1 Z6 z, S* e& f$ ~7 ?
+ m  v7 U/ ^* O& V4 X. Q  S9 }不会的，你可以试试，8-15分钟，元代细胞本来就难消化，在显微镜下看到细胞变圆了才终止消化

科学家

回复 6# 科学家 1 T- i% U! }8 X1 T. O3 G: h) ?7 }

- X; R! r+ F- j" k( p8 {# i0 [& d# g3T3-E1用的a-DMEM是不是很昂贵呀

xxzhang83

你这个是原代嘛，肯定很杂，MSC增殖比其他快，传两代后肯定会纯化的。' N+ {2 f, ]5 l
可以传代了~~~

angel-sakura

回复 7# 科学家 4 g1 g7 L  a: Y4 g! J" n

; C) s5 u5 R: r: W* C9 y不是很贵~

angel-sakura

回复 6# 科学家 ' G, ?. m. F9 a0 s6 E
/ r* b, ^! r! v8 Y8 V" o9 Z3 j2 G/ d
请问你的胰蛋白酶加了EDTA没?