小鼠BMSC的原代照片~

angel-sakura

跟下面这个地址的帖子是配套的，为了方便其他人都能看到~故重新开了一个贴~~3 |1 ~& z, ^( M; {* M- ]8 R2 Q( m: B
http://www.stemcell8.cn/thread-19898-1-1.html) l3 ]- v( c! Z
我是4.20号做的原代，4.23号才开始进行观察，照片如下：
" V' Y8 Q2 s- }! d5 c! Y% v7 O& l9 y& y
( S4 i+ P- l) }! i' ^$ U6 v
4.23号半换液以去除漂浮的杂细胞，4.24观察细胞如下图:
3 W4 M' x1 d; t" L* x
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发现细胞长满大概70%，传代~~但没全部消化下来（用的是0.25%胰蛋白酶无EDTA），大部分细胞仍贴着，时间为2min。
7 n, q+ ]9 x! d; R/ ^6 C消化下来的细胞计数为44.75W/ml，有谁养过小鼠BMSC的请指教下此细胞是否是BMSC，感觉此细胞很小~~相比MC3T3-E（前体成骨细胞），此外，我的操作有不当之处还请指出~~谢谢~~

jisuyun

7 r# y; X. `" `: p3 R' e
7 _% X: Y, N* J3 M, A6 T$ G好多像MSC的细胞啊 为什么我的里面那么多血细胞？* `4 g& f- ~  o3 g( |
难道是因为我没有取肱骨？

angel-sakura

回复 2# jisuyun 2 g! Y9 F! L7 i" ?
我觉得应该不是那个原因，我刚开始养的时候也是有很多红细胞，但之后我有将一个皿中的上清液移到另一个皿中（防止损失未贴壁的BMSC），现在两个皿中的BMSC都长起来了（第2个皿细胞少些），因为HSC等骨髓中的细胞多了也会抑制BMSC的贴壁和分裂（特别是红细胞过多的话沉积在底面使BMSC难以伸出伪足，我去掉一些杂细胞后BMSC就长起来了~~）

科学家

原代细胞本就会有很多杂细胞的，传过两代杂细胞就少了，细胞纯度就增加了，消化时间一般*-15分钟

angel-sakura

回复 4# 科学家
# E+ x7 p" \( V# X4 B! H/ w/ Q& o3 v- _# z9 a
消化时间15min？？？！！那样细胞不都死了吗？

科学家

回复 5# angel-sakura
. `: F! }, E. G. i8 B' I# o% t) j+ B4 D
不会的，你可以试试，8-15分钟，元代细胞本来就难消化，在显微镜下看到细胞变圆了才终止消化

科学家

回复 6# 科学家 3 @1 l. a( g7 `& V/ ?6 E
4 V$ X+ {! c3 s5 H% c" z
3T3-E1用的a-DMEM是不是很昂贵呀

xxzhang83

你这个是原代嘛，肯定很杂，MSC增殖比其他快，传两代后肯定会纯化的。) g, k  d! U/ {) a
可以传代了~~~

angel-sakura

回复 7# 科学家 . y/ {0 c/ h$ t% P, `2 P
$ t* r" R/ w, r7 M
不是很贵~

angel-sakura

回复 6# 科学家 6 H* D1 r' ^; P
# Z" n: k+ U. J6 V# X) k* s0 s
请问你的胰蛋白酶加了EDTA没?