小鼠BMSC的原代照片~

angel-sakura

跟下面这个地址的帖子是配套的，为了方便其他人都能看到~故重新开了一个贴~~
. V, k! Z+ T: K  _- i4 c* Mhttp://www.stemcell8.cn/thread-19898-1-1.html
7 A* Y2 }5 i, W- W! y- k4 C8 L8 [( |我是4.20号做的原代，4.23号才开始进行观察，照片如下：  m& @. X( m3 t
) h% W; n; Z) ^7 b% ^/ G0 `" H

4 P! `- Z. t3 S4.23号半换液以去除漂浮的杂细胞，4.24观察细胞如下图:
; ~* Z. s5 T& A- x1 d8 @5 R' x* [1 m6 i5 U$ s2 {, A6 W

% b7 n6 H# u3 Q5 z发现细胞长满大概70%，传代~~但没全部消化下来（用的是0.25%胰蛋白酶无EDTA），大部分细胞仍贴着，时间为2min。& a. G: \. V- m, @
消化下来的细胞计数为44.75W/ml，有谁养过小鼠BMSC的请指教下此细胞是否是BMSC，感觉此细胞很小~~相比MC3T3-E（前体成骨细胞），此外，我的操作有不当之处还请指出~~谢谢~~

jisuyun

  I: b0 }0 m& r& b5 E; T  F! D& N0 Z7 ~
好多像MSC的细胞啊 为什么我的里面那么多血细胞？! X6 h* v% ^9 t# W* T
难道是因为我没有取肱骨？

angel-sakura

回复 2# jisuyun 0 g# u- K* G, W! L
我觉得应该不是那个原因，我刚开始养的时候也是有很多红细胞，但之后我有将一个皿中的上清液移到另一个皿中（防止损失未贴壁的BMSC），现在两个皿中的BMSC都长起来了（第2个皿细胞少些），因为HSC等骨髓中的细胞多了也会抑制BMSC的贴壁和分裂（特别是红细胞过多的话沉积在底面使BMSC难以伸出伪足，我去掉一些杂细胞后BMSC就长起来了~~）

科学家

原代细胞本就会有很多杂细胞的，传过两代杂细胞就少了，细胞纯度就增加了，消化时间一般*-15分钟

angel-sakura

回复 4# 科学家
; S: |' e& n% p/ r3 L
# N! @0 r) D0 W" w7 n8 @9 m消化时间15min？？？！！那样细胞不都死了吗？

科学家

回复 5# angel-sakura
: X  g9 {: x) E
) h( J& m2 R/ W' N; h% u不会的，你可以试试，8-15分钟，元代细胞本来就难消化，在显微镜下看到细胞变圆了才终止消化

科学家

回复 6# 科学家
  h- h% c" s1 Y! h: R# d- W: K. L2 ?3 K( U) J
3T3-E1用的a-DMEM是不是很昂贵呀

xxzhang83

你这个是原代嘛，肯定很杂，MSC增殖比其他快，传两代后肯定会纯化的。
$ E, |8 x- \4 A- f/ z可以传代了~~~

angel-sakura

回复 7# 科学家 . w0 o: }5 P+ ]/ c
! Y" p8 v1 X( I. I2 _- e
不是很贵~

angel-sakura

回复 6# 科学家 3 \1 M, S0 c3 U' P1 C. N
7 U8 M! [. T9 O+ ~3 {
请问你的胰蛋白酶加了EDTA没?