小鼠BMSC的原代照片~

angel-sakura

跟下面这个地址的帖子是配套的，为了方便其他人都能看到~故重新开了一个贴~~
. @7 |+ a0 \2 ?5 {! uhttp://www.stemcell8.cn/thread-19898-1-1.html3 ~) w; Z/ p) k% T1 A: ?4 {5 t
我是4.20号做的原代，4.23号才开始进行观察，照片如下：
, ?! F4 R2 |3 Z" L+ u* ?9 R' ?
) y: f3 [4 q; X) A2 ], `9 {( Q9 v5 }- G! q
4.23号半换液以去除漂浮的杂细胞，4.24观察细胞如下图:
8 I, }; V% P' ~% r  S0 i5 Y) n1 L1 s' m/ o

; s) Q0 H" b) L" ~发现细胞长满大概70%，传代~~但没全部消化下来（用的是0.25%胰蛋白酶无EDTA），大部分细胞仍贴着，时间为2min。
3 ~4 h" G! E- \' P/ \消化下来的细胞计数为44.75W/ml，有谁养过小鼠BMSC的请指教下此细胞是否是BMSC，感觉此细胞很小~~相比MC3T3-E（前体成骨细胞），此外，我的操作有不当之处还请指出~~谢谢~~

科学家

回复 10# angel-sakura
" ~4 \, G2 K6 k
; |$ C2 k; x  {, e/ |1 n. d" h8 n% M
    没有，加了应该更好哈

angel-sakura

回复 6# 科学家 # h/ y# H  _3 r7 c# p& c* O

  U& F0 D0 G3 J0 V2 x请问你的胰蛋白酶加了EDTA没?

angel-sakura

回复 7# 科学家
5 t) Q# G# N* c0 ?* f: j1 g( P/ y$ C
, J, a& L' s, C7 V1 ]9 p  _不是很贵~

xxzhang83

你这个是原代嘛，肯定很杂，MSC增殖比其他快，传两代后肯定会纯化的。, g, c6 H! J1 ?; P5 ~% ~
可以传代了~~~

科学家

回复 6# 科学家 - b, u; ]2 d& d5 F* `8 P, b

/ E" Z5 D  U: W* w4 j3T3-E1用的a-DMEM是不是很昂贵呀

科学家

回复 5# angel-sakura 7 i0 m/ W& u, Y! ]5 T* T

% Z: }& D' r2 i# \不会的，你可以试试，8-15分钟，元代细胞本来就难消化，在显微镜下看到细胞变圆了才终止消化

angel-sakura

回复 4# 科学家
' D. O7 }( T1 K) K- J; C
9 u0 V8 O) P+ N+ z+ e: @消化时间15min？？？！！那样细胞不都死了吗？

科学家

原代细胞本就会有很多杂细胞的，传过两代杂细胞就少了，细胞纯度就增加了，消化时间一般*-15分钟

angel-sakura

回复 2# jisuyun * R/ m4 D4 L% Z
我觉得应该不是那个原因，我刚开始养的时候也是有很多红细胞，但之后我有将一个皿中的上清液移到另一个皿中（防止损失未贴壁的BMSC），现在两个皿中的BMSC都长起来了（第2个皿细胞少些），因为HSC等骨髓中的细胞多了也会抑制BMSC的贴壁和分裂（特别是红细胞过多的话沉积在底面使BMSC难以伸出伪足，我去掉一些杂细胞后BMSC就长起来了~~）