我做的“ips”，请战友们指点（附图）

小刀

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/ `# V0 [3 Y/ [! y0 \5 V1 M3 X做了大概半年的ips诱导。总之很是不顺利。现诱导四十余日，图片如下，望前辈战友指点& G3 N6 h$ b0 \% U$ Y* B! ^0 n

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) x8 g' j) q# E! z- W+ U% _- u8 M   诱导体会：, D3 Z4 x# {  q
   1。在诱导过程中大约二十五六天时感觉镜下可见克隆特别多，但是，没几日，克隆就会迅速减少。我是隔日换液，考虑可能因为换液不勤导致克隆分化
' d5 t% ~: h& u1 R8 F& P6 z   2.MEF 处理后，细胞生长速度仍然较快，于是就产生了，大量MEF生长的状况# p1 |$ H& O2 ^  ?
   3.貌似的小克隆总是不见其生长扩大，不知道原因为何？莫非不是？

小刀

另外，ips是不是如昙花一现般的即将谢掉了啊？! `6 ^/ F% Q4 K+ }
前辈们请高见！

daviehe

顶楼主

fish_zbw1985

有没有做过AP染色或活细胞染色呢？

双刀

做的是人的吗？

双刀

有没有其他照片？怎么大的克隆只有一个？

wangzhuo822001

MEF 处理的丝裂霉素浓度是不是不够？或者是MEF 细胞浓度太大？

wangzhuo822001

还有就是是不是丝裂霉素作用时间不够

anxjs

看你图片，诱导40余日，饲养层居然还有这么高密度，特别是第三张，有点问题啊。MEF处理后还会生长，肯定是丝裂霉素没处理好，我们丝裂霉素浓度为10ug/ml，T25瓶子长满MEF后我们按4ML的液体量MC的，处理2.5h，如果MC配好后很久没有用，最好再摸下时间，可以适当延长30min。克隆多的时候可以挑几个做下AP染色，确认下先。

hansey

你的MEFs还不错，是因为MEFs还在生长的原因吗？