看看我的 小鼠iPS细胞经过 EB分化的问题（附图）

上海过客

我用的是 H- DMEM。15% FBS，NEAA， 丙酮酸钠，β-巯基乙醇， 谷氨酰胺 的 配方不知道  
$ u, n9 O$ P6 r2 |, q0 \6 E* ?9 o) {6 P/ w. B
做了 三次 成功了  一次 ，不过这一次  24孔 都有跳动细胞 。7 n) h; u2 O2 H2 \' k4 i9 `

# w3 t( v# O9 {   另外 的 细胞 ，感觉  EB 中央隆起的 地方 都 破了 ，不知道 是什么原因呢 ？& f7 f+ V; m& q$ Q3 ^8 d& M
  E  i& i. w) Y1 C7 d# `- `
想知道的 是 1  做 EB的 细胞浓度5 @" D# R. U$ }. c: |
            2  换液时间! p( D4 d) S+ O
            3  培养基的问题
8 v0 c) U& y6 T% k( [' C$ G2 M& i# q            4  我的EB 中央 为什么会破# X4 x7 O3 `8 `6 E6 |
- Y. I& @4 M' K
5 Q, X) b% Z% k, {
看图

上海过客

第二幅图的 中央 细胞 团 好像 烂掉了 。
$ @+ g/ H9 `6 c, {/ }( V* X- u' d5 ^
不知道什么原因。
  R, m  {3 e0 M" [1 m. @
9 Y" s1 g& o8 r  R" c, f但是前面 做过三次 ，有一次成功了，24孔 都有跳动细胞。  其他两次和 上面的图相同

flyboly

IPS是怎么培养出来的啊 可否共享下资料

flyboly

我很是期待啊可是分不够级别不够 没办法看不见啊

sacia

我在ESC经EB诱导过程中也遇到过类似情况
" J( L3 l% Z2 g4 P- t个人觉得，应该是制作EB的细胞状态不是很好或者是EB分化过程中，因营养物质不够导致细胞衰老、死亡。

dulaiyouyu

楼主iPS的pheres看起来很不错。

cortex

第一幅是正常的EBs图片
" h0 R5 J' ]" S; f& x  I第二张看起来细胞都已经死掉了。可能是营养不良吧。。。也可能是团块太大，或者，细胞状态的问题。如果细胞被支原体污染，也会出现这种情况。具体的就得楼主自己判断了。
8 X, s8 R* B8 G( W. p- z你做的EBs细胞团块有多大？起始一般1000个细胞子左右的细胞团块为佳。密度也不要过密。如果太密了，就要勤加培养基，或者转移到新鲜培养基中。

上海过客

楼上 ，  拟胚体  转移到 24孔板 后 ，换液 时间 大概是多少 呢？

上海过客

: h8 L, R1 l( z: ^
; r9 c* E2 }' m2 s
嗯 ，那我的密度是有点大了 。/ f. D, A7 w3 w5 W& s% ~. T* ?
' y# n  V9 i1 v2 Y5 O5 h+ H
) g/ k7 e8 }# N/ i) E
我的 起始浓度时  12万/ml  .20ul小滴  。大概是  2400个细胞/滴 。
- `) d' D* H& G) m" Z1 x4 v6 t9 t! [" |$ v/ Q, }% z
那就是 密度 有点大了 。  , N5 Z) u) E( s4 G

' W1 I; Q- x9 V/ m" |% l
. w, x9 M5 B7 Z3 f 用 细菌培养皿  培养的  EB 感觉  很小，但是状态更好 。  我再试试这个方法

上海过客

我刚才比较了一下 分化培养基 。
; O3 O$ z& D/ H
' {8 y2 Y# R) M( |2 z# X. v加了 丙酮酸钠  ，不知道是不是  这个问题 。
2 r! w( y/ y* e* p- x1 L. Q, }6 s. h9 H1 b
不加丙酮酸钠的  培养基已经配了 。  等等  看结果 。