看看我的 小鼠iPS细胞经过 EB分化的问题（附图）

上海过客

我用的是 H- DMEM。15% FBS，NEAA， 丙酮酸钠，β-巯基乙醇， 谷氨酰胺 的 配方不知道  
  f6 ~2 Y: r. l& N, Z0 _. V; Y5 K5 l* o* |$ [  h. d) x& d7 S
做了 三次 成功了  一次 ，不过这一次  24孔 都有跳动细胞 。
9 r2 z8 H  q4 D* J
- ?. `7 n: s+ I1 i7 T* A   另外 的 细胞 ，感觉  EB 中央隆起的 地方 都 破了 ，不知道 是什么原因呢 ？
/ R2 ]) ?- |9 u% a0 n# a5 P: S% l$ r: Z
想知道的 是 1  做 EB的 细胞浓度' ~- d7 j; [) t" `. R# l) W+ e
            2  换液时间4 w4 z7 a' l2 V( ]( q  R1 W
            3  培养基的问题+ A  z5 P# ~7 z3 h/ j
            4  我的EB 中央 为什么会破
: q) x, O! |+ x) e
: |: _# _. z; S4 v9 r" V9 j& t3 p* ?
看图

上海过客

第二幅图的 中央 细胞 团 好像 烂掉了 。
3 n  V6 z# T& F$ w- E
% U1 x% z  W, Q! ^8 |不知道什么原因。5 P0 A; Q. z' F/ L; k4 {

& Z5 V! X$ |: F# i, M3 e但是前面 做过三次 ，有一次成功了，24孔 都有跳动细胞。  其他两次和 上面的图相同

flyboly

IPS是怎么培养出来的啊 可否共享下资料

flyboly

我很是期待啊可是分不够级别不够 没办法看不见啊

sacia

我在ESC经EB诱导过程中也遇到过类似情况
1 O# j: a$ t* o7 j6 J& W: L个人觉得，应该是制作EB的细胞状态不是很好或者是EB分化过程中，因营养物质不够导致细胞衰老、死亡。

dulaiyouyu

楼主iPS的pheres看起来很不错。

cortex

第一幅是正常的EBs图片# o" j: s& b8 R: v. [- _& ]
第二张看起来细胞都已经死掉了。可能是营养不良吧。。。也可能是团块太大，或者，细胞状态的问题。如果细胞被支原体污染，也会出现这种情况。具体的就得楼主自己判断了。
- v( t+ F+ Y: H4 G你做的EBs细胞团块有多大？起始一般1000个细胞子左右的细胞团块为佳。密度也不要过密。如果太密了，就要勤加培养基，或者转移到新鲜培养基中。

上海过客

楼上 ，  拟胚体  转移到 24孔板 后 ，换液 时间 大概是多少 呢？

上海过客

. {2 ]8 O  L7 J' |; f; ^/ \
4 X. f% r. l' I! I8 }+ P嗯 ，那我的密度是有点大了 。
" R+ U# P9 e+ {' Y, e# A% M( i# m. b; L' e: o8 O  n( [

# h: h. T5 j) ^. z# Q我的 起始浓度时  12万/ml  .20ul小滴  。大概是  2400个细胞/滴 。
) E" b& k! d& ]! J
2 W3 c9 ]: _  v9 r那就是 密度 有点大了 。  7 |  r: U9 s/ o( u

/ y2 |$ }9 d( T2 c' a4 Z
, u: f# k; V/ Q' q3 D* } 用 细菌培养皿  培养的  EB 感觉  很小，但是状态更好 。  我再试试这个方法

上海过客

我刚才比较了一下 分化培养基 。
* Z9 Z/ S6 [6 ]8 ?5 s
1 S7 o" F* l! |  _8 c  ?; t. q加了 丙酮酸钠  ，不知道是不是  这个问题 。
+ N  c- M. E: a5 i5 f
9 |0 [1 j, U( ~( c0 Y- A不加丙酮酸钠的  培养基已经配了 。  等等  看结果 。