看看我的 小鼠iPS细胞经过 EB分化的问题（附图）

上海过客

我用的是 H- DMEM。15% FBS，NEAA， 丙酮酸钠，β-巯基乙醇， 谷氨酰胺 的 配方不知道  ! A1 r6 L% S+ X* X
! L: A% x3 {8 G3 ?; ]3 r, t* v$ m( c
做了 三次 成功了  一次 ，不过这一次  24孔 都有跳动细胞 。
: i5 P) _5 h* \3 O. {/ I
6 f7 U$ p/ x$ _( ~" \2 w   另外 的 细胞 ，感觉  EB 中央隆起的 地方 都 破了 ，不知道 是什么原因呢 ？
& Z. ~# H, Y7 b4 a0 ~1 Z$ D, S; T* U% `9 f6 [5 G
想知道的 是 1  做 EB的 细胞浓度
! g7 D: |8 m8 U' M; u            2  换液时间1 }* V  ?; k* E- I
            3  培养基的问题3 e" l  W; }9 V1 Y. p; B
            4  我的EB 中央 为什么会破, q! I# p, S; I* T! a& u

3 `% q: R+ ]( O9 o1 p7 x% N% v( N/ M. I! u
看图

上海过客

第二幅图的 中央 细胞 团 好像 烂掉了 。8 ]+ D% _% `0 ]' Z  ~" ?- `
" U# m- u, h3 q5 i3 c* ?) }
不知道什么原因。
4 S- i  k( S. M+ \3 _" W* h* N! ]0 l9 O; V+ s
但是前面 做过三次 ，有一次成功了，24孔 都有跳动细胞。  其他两次和 上面的图相同

flyboly

IPS是怎么培养出来的啊 可否共享下资料

flyboly

我很是期待啊可是分不够级别不够 没办法看不见啊

sacia

我在ESC经EB诱导过程中也遇到过类似情况
1 g6 B1 {& n* d6 e0 n4 y1 a个人觉得，应该是制作EB的细胞状态不是很好或者是EB分化过程中，因营养物质不够导致细胞衰老、死亡。

dulaiyouyu

楼主iPS的pheres看起来很不错。

cortex

第一幅是正常的EBs图片
  R- v" H9 c+ i8 f2 t+ D第二张看起来细胞都已经死掉了。可能是营养不良吧。。。也可能是团块太大，或者，细胞状态的问题。如果细胞被支原体污染，也会出现这种情况。具体的就得楼主自己判断了。
3 r# z, k6 V* u! w. w你做的EBs细胞团块有多大？起始一般1000个细胞子左右的细胞团块为佳。密度也不要过密。如果太密了，就要勤加培养基，或者转移到新鲜培养基中。

上海过客

楼上 ，  拟胚体  转移到 24孔板 后 ，换液 时间 大概是多少 呢？

上海过客

4 H2 b5 |, P# F2 M# s2 J$ w2 o
1 u* u7 C  ]) Y( W. Z- I嗯 ，那我的密度是有点大了 。
& r: q6 A1 `1 {( X$ f7 Q: q1 S- y5 B" s) W/ h
" ^0 P  x# G( I' ^# \
我的 起始浓度时  12万/ml  .20ul小滴  。大概是  2400个细胞/滴 。# F+ m) \3 [8 O8 t" m! a# N* s

, V. L: m( H- h4 J8 B  Y2 u$ M那就是 密度 有点大了 。  
8 b* B. S2 o6 E+ v6 [- o* Q& L" ?; x6 l. r$ v0 ?, Y
# |* g  C- U! {& i- _% Y! D* V# N
用 细菌培养皿  培养的  EB 感觉  很小，但是状态更好 。  我再试试这个方法

上海过客

我刚才比较了一下 分化培养基 。) ]" E" ]  C2 J5 _$ t

, V: j2 J2 Y3 _加了 丙酮酸钠  ，不知道是不是  这个问题 。$ O- ?8 r. G* y5 L! ?! W3 |

, q1 W: T" [, q- ]4 U. l3 |不加丙酮酸钠的  培养基已经配了 。  等等  看结果 。