干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
中源协和

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 91322|回复: 12
go

询问一个关于基质胶的问题!   [复制链接]

Rank: 2

积分
127 
威望
127  
包包
195  
楼主
发表于 2010-8-11 10:46 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位专家们,大家好,做肿瘤干细胞,我看到文献上说可以用ECM gel 铺板培养,我今天询问了这个胶,但不知道具体用法和使用范围及意义,请有用过这玩意的专家给个答案,多谢!
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 2

积分
68 
威望
68  
包包
199  
沙发
发表于 2010-8-11 12:26 |只看该作者
回复 1# ahfjwangrui
5 K3 ?( s1 X" c; }) {! p5 a) l/ ?7 [( R. r5 ?

* z9 V& U2 ], V' E4 a    看你要用肿瘤干细胞做什么,基质胶一般用来检测细胞的侵袭、生长能力,如果你要做肿瘤干细胞的克隆、生长能力可以用软琼脂糖克隆实验,不过比较麻烦些
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
127 
威望
127  
包包
195  
藤椅
发表于 2010-8-13 09:11 |只看该作者
回复 2# 胡问成 3 b9 _; w8 Y; P7 c/ _3 @

; @, P7 Q1 `# H( s7 W
. I0 T" v4 g8 N    我是看很多文献说是在培养干细胞时铺板用
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 2 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 2   查看全部评分

Rank: 2

积分
292 
威望
292  
包包
697  

优秀会员

板凳
发表于 2010-8-20 12:07 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
Application:Recommended for use as a cell culture substratum. For a 24-well plate, use 230-250 μl/well. For a 96-well plate, use 50-100 μl/well. Thaw gel overnight at 2-8 °C before use. The thawed gel may be diluted up to two-fold with cold (2-8 °C) Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium. Gel dilutions should be made before it is added to the plate. ECM will gel within 5 minutes at 20 °C. For prolonged manipulations, work should be conducted below 10 °C. Dispense gel to wells of a multiwell plate using pipettes pre-cooled to 2-8 °C. A gel forms at 37 °C and maintains this form with culture medium for at least 14 days. Cells may be plated on top of a thin gel layer (0.5 mm) or cultured inside a 1 mm layer. When cultured inside, cells should be added to the gel prior to plating at a recommended density of 3-4 × 104 cells per mL. To dissociate cells from the gel, use protease (dispase) dissolved in PBS without calcium, magnesium, and EDTA at a working concentration of 0.6-2.4 units/ml.
- H1 `! ]4 \" b# V  c# S+ ]  Epithelial cells, endothelial cells, muscle cells, nerve cells, tumor cells
9 B1 v/ N! L; f  k  H. C4 H( ?4 v' q
Caution:ECM gel may be stored up to 72 hours at 2-8 °C.
) a% Z2 N% \5 U' u( J
4 D- f8 p9 v& N, q. d  rOther Notes:ECM gel is composed primarily of laminin, collagen type IV, heparan sulfate proteoglycan and entactin. Approximately 8-12 mg/ml basement membrane matrix protein in Dulbecco′s modified Eagle′s medium with 50 μg/ml gentamicin.
# k, X, U! y6 F
5 Z* A( g, W- s/ B1 V1 y# @Properties* F" _% l- z! }
sterility dialyzed against chloroform
9 ^' A* W9 B+ Z3 E* Bform liquid
% `3 [8 Z' X: f. W1 f) t" M: f0 {1 g* Sconcentration 8 - 12 mg/mL
" J, X. G1 }! ^: Psurface coverage 6‑10 μg/cm2
4 |8 B& S# D; ~% b5 jtotal impurities endotoxin, tested
  z  j  h* n+ D2 i0 gsuitability cell culture tested
: D5 J" @& y! d) c9 X) h- m1 @shipped in dry ice / V) b% v2 h- D% l+ d! C
storage temp. −20°C
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
7  
包包
41  
报纸
发表于 2013-12-5 21:57 |只看该作者
楼主用基质胶养肿瘤干细胞结果怎么样?CSC能长起来么,会不会分化?
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 2

积分
56 
威望
56  
包包
1337  
地板
发表于 2013-12-5 23:57 |只看该作者
我用含生长因子的ECM培养CSCs,in matrigel 会分化,on matrilgel 会出现类似于tubeformation的结果,应该也是一种分化现象。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 3 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
7  
包包
41  
7
发表于 2013-12-6 22:37 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子" i+ n( V+ q/ l8 q5 W/ l. I8 n, I6 m

4 c- P" G  E& J/ t9 U这个分化和生长因子不知道关系大不大,还是matrigel本身基本成分促进了分化?
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
7  
包包
41  
8
发表于 2013-12-6 22:44 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子
8 \# v9 k$ R9 r, B" J' ]0 U* i1 d( Q; y# e5 c
还有请问你培养的时候是无血清培养还是含血清培养?谢谢!

Rank: 2

积分
56 
威望
56  
包包
1337  
9
发表于 2013-12-6 22:57 |只看该作者
生长因子应该很重要,我培养的时候是完全培养基含血清的,就是为了做分化的。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
56 
威望
56  
包包
1337  
10
发表于 2013-12-6 22:59 |只看该作者
忘记说了,有一次我用BD不含生长因子的ECM做分化,效果差很多。生长因子在这里的作用应该是比较重要的。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 5   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2026-5-6 19:59

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.