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询问一个关于基质胶的问题!   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-8-11 10:46 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位专家们,大家好,做肿瘤干细胞,我看到文献上说可以用ECM gel 铺板培养,我今天询问了这个胶,但不知道具体用法和使用范围及意义,请有用过这玩意的专家给个答案,多谢!
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沙发
发表于 2010-8-11 12:26 |只看该作者
回复 1# ahfjwangrui
: {" y  E  z5 y( t* J: i3 o5 [7 @' h5 j2 b
3 y0 B" G6 I; k4 ^
    看你要用肿瘤干细胞做什么,基质胶一般用来检测细胞的侵袭、生长能力,如果你要做肿瘤干细胞的克隆、生长能力可以用软琼脂糖克隆实验,不过比较麻烦些
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藤椅
发表于 2010-8-13 09:11 |只看该作者
回复 2# 胡问成
' x9 k9 O$ |: E0 u. t# [8 V) U
- g/ x: R$ K! J6 X# V2 K( f8 a; K) f7 l" I  q
    我是看很多文献说是在培养干细胞时铺板用
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优秀会员

板凳
发表于 2010-8-20 12:07 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
Application:Recommended for use as a cell culture substratum. For a 24-well plate, use 230-250 μl/well. For a 96-well plate, use 50-100 μl/well. Thaw gel overnight at 2-8 °C before use. The thawed gel may be diluted up to two-fold with cold (2-8 °C) Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium. Gel dilutions should be made before it is added to the plate. ECM will gel within 5 minutes at 20 °C. For prolonged manipulations, work should be conducted below 10 °C. Dispense gel to wells of a multiwell plate using pipettes pre-cooled to 2-8 °C. A gel forms at 37 °C and maintains this form with culture medium for at least 14 days. Cells may be plated on top of a thin gel layer (0.5 mm) or cultured inside a 1 mm layer. When cultured inside, cells should be added to the gel prior to plating at a recommended density of 3-4 × 104 cells per mL. To dissociate cells from the gel, use protease (dispase) dissolved in PBS without calcium, magnesium, and EDTA at a working concentration of 0.6-2.4 units/ml.
! q5 }. J5 K. @  Epithelial cells, endothelial cells, muscle cells, nerve cells, tumor cells $ y* R4 p4 d; H
; W' C1 Q3 e1 X" w& f9 C5 c9 e" h$ H
Caution:ECM gel may be stored up to 72 hours at 2-8 °C." D: \1 p, \% }3 t7 L

& _( Z) G/ X% ^2 C) r# aOther Notes:ECM gel is composed primarily of laminin, collagen type IV, heparan sulfate proteoglycan and entactin. Approximately 8-12 mg/ml basement membrane matrix protein in Dulbecco′s modified Eagle′s medium with 50 μg/ml gentamicin.
+ I) b9 {& V- ~) x
5 K/ I' [) j' d% P4 Z% cProperties. ^1 o$ y) d% V. R2 }7 |
sterility dialyzed against chloroform
. s6 ?' C9 e+ f/ q7 e2 g9 nform liquid 6 ]3 Z9 Z" V3 @- s+ C- M+ t
concentration 8 - 12 mg/mL
/ v9 z3 q5 ~+ H6 \% k, R: Q# D7 Qsurface coverage 6‑10 μg/cm2 . X+ S( V7 m2 c3 V  c0 D$ o& u
total impurities endotoxin, tested ( f& B5 f- F" x" w7 G+ c* z' l0 o' H7 J
suitability cell culture tested + d: X. E7 ^9 N9 f
shipped in dry ice
$ j# b( x* L6 pstorage temp. −20°C
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报纸
发表于 2013-12-5 21:57 |只看该作者
楼主用基质胶养肿瘤干细胞结果怎么样?CSC能长起来么,会不会分化?
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地板
发表于 2013-12-5 23:57 |只看该作者
我用含生长因子的ECM培养CSCs,in matrigel 会分化,on matrilgel 会出现类似于tubeformation的结果,应该也是一种分化现象。
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发表于 2013-12-6 22:37 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子
1 \+ t5 z' L1 l& @
, H2 _) y% K! g1 s4 S这个分化和生长因子不知道关系大不大,还是matrigel本身基本成分促进了分化?
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发表于 2013-12-6 22:44 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子
- r( O* x6 i* i6 i6 R$ E$ D# `6 R3 Z$ E
还有请问你培养的时候是无血清培养还是含血清培养?谢谢!

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发表于 2013-12-6 22:57 |只看该作者
生长因子应该很重要,我培养的时候是完全培养基含血清的,就是为了做分化的。
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发表于 2013-12-6 22:59 |只看该作者
忘记说了,有一次我用BD不含生长因子的ECM做分化,效果差很多。生长因子在这里的作用应该是比较重要的。
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