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询问一个关于基质胶的问题!   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-8-11 10:46 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位专家们,大家好,做肿瘤干细胞,我看到文献上说可以用ECM gel 铺板培养,我今天询问了这个胶,但不知道具体用法和使用范围及意义,请有用过这玩意的专家给个答案,多谢!
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沙发
发表于 2010-8-11 12:26 |只看该作者
回复 1# ahfjwangrui 5 z  r1 W( [* L0 q
( k+ d6 b; p" b2 l$ Y& ?( i# O
/ D, }, O9 d$ S1 W
    看你要用肿瘤干细胞做什么,基质胶一般用来检测细胞的侵袭、生长能力,如果你要做肿瘤干细胞的克隆、生长能力可以用软琼脂糖克隆实验,不过比较麻烦些
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藤椅
发表于 2010-8-13 09:11 |只看该作者
回复 2# 胡问成 & @  N$ U! ?! g/ i" s: \5 ^, Z; p
3 j6 d, f% R3 N6 j' i2 L
# ~5 \; R. ^/ `2 A1 y& m
    我是看很多文献说是在培养干细胞时铺板用
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优秀会员

板凳
发表于 2010-8-20 12:07 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
Application:Recommended for use as a cell culture substratum. For a 24-well plate, use 230-250 μl/well. For a 96-well plate, use 50-100 μl/well. Thaw gel overnight at 2-8 °C before use. The thawed gel may be diluted up to two-fold with cold (2-8 °C) Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium. Gel dilutions should be made before it is added to the plate. ECM will gel within 5 minutes at 20 °C. For prolonged manipulations, work should be conducted below 10 °C. Dispense gel to wells of a multiwell plate using pipettes pre-cooled to 2-8 °C. A gel forms at 37 °C and maintains this form with culture medium for at least 14 days. Cells may be plated on top of a thin gel layer (0.5 mm) or cultured inside a 1 mm layer. When cultured inside, cells should be added to the gel prior to plating at a recommended density of 3-4 × 104 cells per mL. To dissociate cells from the gel, use protease (dispase) dissolved in PBS without calcium, magnesium, and EDTA at a working concentration of 0.6-2.4 units/ml.
, p, x" M3 u* [2 P8 s& L  Epithelial cells, endothelial cells, muscle cells, nerve cells, tumor cells 1 }2 P/ U: ?& M6 w& f

4 n- y& H3 `7 sCaution:ECM gel may be stored up to 72 hours at 2-8 °C.
! C% I. s; ]6 F- u- _* v2 j1 {2 D& D8 w: v' L9 I
Other Notes:ECM gel is composed primarily of laminin, collagen type IV, heparan sulfate proteoglycan and entactin. Approximately 8-12 mg/ml basement membrane matrix protein in Dulbecco′s modified Eagle′s medium with 50 μg/ml gentamicin.0 c2 ^& b# _1 i' A. x; A6 t
. G; W1 T- p; b4 q4 r
Properties# e$ s1 ~! W" X, Q* `/ x7 d' W/ v
sterility dialyzed against chloroform . ?( P6 Y9 `; w" a
form liquid 5 O/ Q7 i; ?  ~: N
concentration 8 - 12 mg/mL / N3 _! t; m5 @( J, U, o. L/ m* `
surface coverage 6‑10 μg/cm2
. p- f2 \  m( ?  gtotal impurities endotoxin, tested 3 r' n0 V0 q: ~1 ^2 P
suitability cell culture tested
" @. x& i) a1 M( F6 O* ]& R: E* r/ Ishipped in dry ice
( X  m& d0 c" A! A3 t; wstorage temp. −20°C
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报纸
发表于 2013-12-5 21:57 |只看该作者
楼主用基质胶养肿瘤干细胞结果怎么样?CSC能长起来么,会不会分化?
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地板
发表于 2013-12-5 23:57 |只看该作者
我用含生长因子的ECM培养CSCs,in matrigel 会分化,on matrilgel 会出现类似于tubeformation的结果,应该也是一种分化现象。
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发表于 2013-12-6 22:37 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子
1 v6 B2 G3 T7 n8 h
! X& s0 ^9 K: G这个分化和生长因子不知道关系大不大,还是matrigel本身基本成分促进了分化?
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发表于 2013-12-6 22:44 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子# A" Q$ f$ g8 J9 e# E
6 k8 k/ o% W; A8 y
还有请问你培养的时候是无血清培养还是含血清培养?谢谢!

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发表于 2013-12-6 22:57 |只看该作者
生长因子应该很重要,我培养的时候是完全培养基含血清的,就是为了做分化的。
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发表于 2013-12-6 22:59 |只看该作者
忘记说了,有一次我用BD不含生长因子的ECM做分化,效果差很多。生长因子在这里的作用应该是比较重要的。
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