干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 86694|回复: 12
go

询问一个关于基质胶的问题!   [复制链接]

Rank: 2

积分
127 
威望
127  
包包
195  
楼主
发表于 2010-8-11 10:46 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位专家们,大家好,做肿瘤干细胞,我看到文献上说可以用ECM gel 铺板培养,我今天询问了这个胶,但不知道具体用法和使用范围及意义,请有用过这玩意的专家给个答案,多谢!
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 2

积分
68 
威望
68  
包包
199  
沙发
发表于 2010-8-11 12:26 |只看该作者
回复 1# ahfjwangrui
$ i0 p0 C$ d$ [9 d- Z% Q' t5 i
, P. k7 q* D+ `) A1 j1 S- t3 t4 n  H% H: i6 g
    看你要用肿瘤干细胞做什么,基质胶一般用来检测细胞的侵袭、生长能力,如果你要做肿瘤干细胞的克隆、生长能力可以用软琼脂糖克隆实验,不过比较麻烦些
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
127 
威望
127  
包包
195  
藤椅
发表于 2010-8-13 09:11 |只看该作者
回复 2# 胡问成 ! t; y7 Y. e$ o. K

/ Y  f) h' w# L+ X' V7 e* \$ o2 `: y; C9 f* e+ \
    我是看很多文献说是在培养干细胞时铺板用
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 2 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 2   查看全部评分

Rank: 2

积分
292 
威望
292  
包包
697  

优秀会员

板凳
发表于 2010-8-20 12:07 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
Application:Recommended for use as a cell culture substratum. For a 24-well plate, use 230-250 μl/well. For a 96-well plate, use 50-100 μl/well. Thaw gel overnight at 2-8 °C before use. The thawed gel may be diluted up to two-fold with cold (2-8 °C) Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium. Gel dilutions should be made before it is added to the plate. ECM will gel within 5 minutes at 20 °C. For prolonged manipulations, work should be conducted below 10 °C. Dispense gel to wells of a multiwell plate using pipettes pre-cooled to 2-8 °C. A gel forms at 37 °C and maintains this form with culture medium for at least 14 days. Cells may be plated on top of a thin gel layer (0.5 mm) or cultured inside a 1 mm layer. When cultured inside, cells should be added to the gel prior to plating at a recommended density of 3-4 × 104 cells per mL. To dissociate cells from the gel, use protease (dispase) dissolved in PBS without calcium, magnesium, and EDTA at a working concentration of 0.6-2.4 units/ml.
* M2 l9 A. [, |* Z* W  Epithelial cells, endothelial cells, muscle cells, nerve cells, tumor cells ) J% w6 k+ h8 p
) C& a: F$ z' e6 ^; F3 ^0 \' D
Caution:ECM gel may be stored up to 72 hours at 2-8 °C.
  `* \1 B  Y% Q+ q3 [  p  }
# r7 P; @8 [  BOther Notes:ECM gel is composed primarily of laminin, collagen type IV, heparan sulfate proteoglycan and entactin. Approximately 8-12 mg/ml basement membrane matrix protein in Dulbecco′s modified Eagle′s medium with 50 μg/ml gentamicin.
/ Z- ^8 }; `7 E; U+ y7 }" C' S, C4 J  k; C" m$ C$ G$ C, b
Properties
" Q  w5 `; M/ ^sterility dialyzed against chloroform
# M% |% N2 j& j" M, ~8 E- w& Dform liquid
- x6 w* U8 m8 \9 I) P9 {. @concentration 8 - 12 mg/mL
1 \4 y: ?( b5 U6 Rsurface coverage 6‑10 μg/cm2
# H' v! R+ C. v* [7 E+ k6 W, wtotal impurities endotoxin, tested
4 [. S! e! \8 b  v) D- ksuitability cell culture tested
! a" r; \: W: K6 ushipped in dry ice
- G; q2 l! {/ o8 O3 Y% D. }+ n4 R/ wstorage temp. −20°C
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
7  
包包
41  
报纸
发表于 2013-12-5 21:57 |只看该作者
楼主用基质胶养肿瘤干细胞结果怎么样?CSC能长起来么,会不会分化?
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 2

积分
56 
威望
56  
包包
1337  
地板
发表于 2013-12-5 23:57 |只看该作者
我用含生长因子的ECM培养CSCs,in matrigel 会分化,on matrilgel 会出现类似于tubeformation的结果,应该也是一种分化现象。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 3 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
7  
包包
41  
7
发表于 2013-12-6 22:37 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子# u! k5 }/ p" b7 w( B) U6 j3 V7 i

! \! M$ {2 f; ^7 a这个分化和生长因子不知道关系大不大,还是matrigel本身基本成分促进了分化?
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
7  
包包
41  
8
发表于 2013-12-6 22:44 |只看该作者
回复 leiwang 的帖子3 ]2 g" w6 L+ {

  G0 M$ E5 Z* P$ V还有请问你培养的时候是无血清培养还是含血清培养?谢谢!

Rank: 2

积分
56 
威望
56  
包包
1337  
9
发表于 2013-12-6 22:57 |只看该作者
生长因子应该很重要,我培养的时候是完全培养基含血清的,就是为了做分化的。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
56 
威望
56  
包包
1337  
10
发表于 2013-12-6 22:59 |只看该作者
忘记说了,有一次我用BD不含生长因子的ECM做分化,效果差很多。生长因子在这里的作用应该是比较重要的。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 5   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-5-26 09:13

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.