急求油红O 染色提取法的原理步骤

richard_terry

油红O 染色提取法，先谢谢了
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油红O为脂溶性,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料,在脂肪内能高度溶解,从而染色,能保存组织中的脂肪滴
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染色步骤：
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1 先小心轻缓倒去培养夜。 ) h/ n; _" B* B
2 用PBS轻缓漂洗（不洗没问题）。
9 m" V/ W% ], P4 O/ p3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。甲醛对脂肪没有什么固定，但能固定好脂肪细胞膜，不让脂肪移位。 3 R* x2 `4 y! [$ A- Z
4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。
" `, Q: x# ?' V# i5 E5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
; ]0 [7 j0 H, P  w) u9 P6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。 8 f+ C) y* E1 p3 a/ ~
7 复染，淡苏木染色1/5分钟，PBS漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
7 X7 n) |1 O/ G( V3 v/ E# e8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。 # M% Z# i& D7 k* _- P* a- r
9 显微镜观察。
7 a5 |- ~& B5 i+ E9 v" }

chuanbaozang

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