急求油红O 染色提取法的原理步骤

richard_terry

油红O 染色提取法，先谢谢了
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chuanbaozang

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lxy07

油红O为脂溶性,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料,在脂肪内能高度溶解,从而染色,能保存组织中的脂肪滴* Q) K2 _8 @! @- ?
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染色步骤： 8 @. Y* `' D8 f, k4 ^/ J' ?
4 S9 r) @0 n! s3 J$ r* N- ]
1 先小心轻缓倒去培养夜。
1 ?4 P5 }9 l0 p+ V2 用PBS轻缓漂洗（不洗没问题）。
- Y# U3 i9 J+ I( T) q9 v3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。甲醛对脂肪没有什么固定，但能固定好脂肪细胞膜，不让脂肪移位。 " c, l# U2 ^$ T9 {
4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。 5 k" X1 q% ?, ^
5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
# \: G" o" ~$ E* f6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
0 A; j# W+ [9 D+ W1 n& G7 复染，淡苏木染色1/5分钟，PBS漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。 / b' p1 Y/ R" s/ a* k  e' w* e0 {
8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。 ( R* v9 \+ i4 V) X$ Y  {; o# y- t
9 显微镜观察。
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