急求油红O 染色提取法的原理步骤

richard_terry

油红O 染色提取法，先谢谢了4 M8 X$ ~8 `! i' w+ k+ [
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chuanbaozang

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lxy07

油红O为脂溶性,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料,在脂肪内能高度溶解,从而染色,能保存组织中的脂肪滴% ]0 N6 Q/ R4 b& _% @2 d4 q
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染色步骤： 8 c% x+ |) k3 J2 W9 }4 Q' x: j4 g
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1 先小心轻缓倒去培养夜。 # m  ?$ e" @/ g3 O) h+ P" S
2 用PBS轻缓漂洗（不洗没问题）。
# ?: a% C0 a5 x$ g3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。甲醛对脂肪没有什么固定，但能固定好脂肪细胞膜，不让脂肪移位。
) [. n% i# P+ ^/ A4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。 ! f2 ^; Y7 k5 d
5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
( T% D8 W1 O. X6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
/ V( z' K- C- w" A4 p" J! N8 ^7 复染，淡苏木染色1/5分钟，PBS漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
# c  [* j. l- u! D+ W8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。
8 H9 B# f+ o: p9 d! A9 显微镜观察。
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