贴壁培养神经干细胞

smkx

请问有没有人用贴壁培养的办法养NSC?
! w' ]* q3 {3 X- P. R  W% p效果如何？

iseeyou1210

上周去uk开会听人说了,效果还不错,我正在要protocol.; @" I; }1 k7 V  J: `
等等把.

smkx

回复 2# iseeyou1210 # L& a. D' f& ~. A

6 j1 X" x2 i5 |; v3 Z6 w* Q9 J8 {+ \! u# Z/ A4 I
    好，等你好消息

深海寂寞鱼

to smkx兄：
2 Z7 j* v% V& o% @! g+ T; A# K8 [; }) r; N
    贴壁培养神经干细胞效果十分不错，细胞的增殖状态要比悬浮的神经球培养好很多；
7 S0 c% C) s( Y8 c+ @, Y
7 a# h' \7 M" B. m: `- f: a: _5 X    而且未分化细胞的比例也高。3 M$ i1 G- l* D( m: @6 ~
' H0 i+ D3 i1 z- d7 D% }3 e
    培养的方法和咱们通常用的方法大同小异。  T/ Y8 M. ?' o) N& \( _% n/ t

# e* a3 _2 H$ e    首先注意把培养皿／培养瓶要用Laminine包被好，通常是按1－2ug／cm2，37oC包被过夜。说明书上说的是包被3小时，但是包被过夜效果会很好。* w* o6 B: e) H4 x: P4 _6 Y* L
( Q5 A2 V: }8 F
    ～～～～，不过Laminine可是相当贵的，每用一点点我都心疼不已。" ~* J7 ^% ~8 e. G1 n
, @) p/ A: {* s6 L% f+ m
    其次，这个方法最初作者的培养基里N2是自己配制的，提高了N2里每个组分的浓度，他认为这样有利于细胞的贴壁。但是我培养的时候没有按他的方法配制N2，还是用的invitrogen商品化的N2，觉得效果也不错。9 a/ n/ F% [5 y/ E

4 O# i1 O4 U% c/ u" Z9 J    再者，我是用sigma的Accutase消化的组织（37oC，15－20分钟），觉得细胞的活性很好。
/ l+ B2 E4 H; n  k2 O" \: G0 r( W( N# O: e" I# U& v
    最后补充一下，这个方法不是什么新东东，在一些研究神经干细胞的实验室这是一个很成熟的方法。只要认真按照经典文献去做，一定能够成功的。
: I, V5 X  U. I+ k( t
- Y" t* s5 h" b% @4 l) |* ~    祝好运！！

smkx

, I8 o) K7 }& m- K
+ ~/ S# T3 q) c# J" N回复 4# 深海寂寞鱼 6 y, c& e( ^& G# T( P5 |

  F+ X/ n  p8 K5 {/ C* N2 S9 d% g$ y/ L
    谢谢这位前辈高手，不知道您说的经典文献是哪些篇，可以传上来或者告诉我title吗，再次感谢！

深海寂寞鱼

回复 5# smkx $ Y" C) t' R) |  H% C* m

5 j2 h& m5 |' S  m* [1 wto smkx兄：; W( _/ i  @& F" F$ m  \/ c

/ e6 O) c1 C' T5 d. K, n    这方面研究中，有三篇文献相对比较经典，分别是：9 t; Q0 r& c/ g3 i6 f' w, ~, q
( ?+ H- P' ?. C
1. Conti, L., Pollard, S.M., Gorba, T., Reitano, E., Toselli, M., Biella, G., Sun, Y.,Sanzone, S., Ying, Q.L., Cattaneo, E., et al. (2005). Niche-independent
  |' ]$ _3 C/ m+ Gsymmetrical self-renewal of a mammalian tissue stem cell. PLoS Biol. 3, e283
$ \; r8 X8 U5 v1 o. `& W' S9 u9 j: {) B
2. Pollard, S.M., Conti, L., Sun, Y., Goffredo, D., and Smith, A. (2006). Adherent neural stem (NS) cells from fetal and adult forebrain. Cereb. Cortex 16(Suppl 1), i112–i120.$ F  s9 F" V: W4 {% R( u

' [4 R! {  o& ^+ J2 H/ h/ i3 T$ C" V3. Sun, Y., Pollard, S., Conti, L., Toselli, M., Biella, G., Parkin, G., Willatt, L., Falk, A., Cattaneo, E., and Smith, A. (2008). Long-term tripotent differentiation
, V) C" z; Z. W% y6 a9 b+ S1 dcapacity of human neural stem (NS) cells in adherent culture. Mol. Cell. Neurosci. 38, 245–258.& J+ p  Z( l1 F* h- e

, X& G  P+ B% c+ v4 u/ w" y4 B' ^全文PDF版如下，希望对你能有所帮助。
& z, P: C  q6 T1 h7 U1. ' ]& E# {- z/ \5 `% f8 A- Q* {8 I. u
2.
- s! u# @0 f! R3.

leedh1223

我想问一下用贴壁培养的方法来培养神经干细胞，从原代取材就开始的吗？还是到后期才换用这种方法的？

leedh1223

还有，贴壁培养干细胞，那它分化的比例高吗？

smkx

回复 6# 深海寂寞鱼
) J, v/ W0 q% x' i0 ]% h' |- i! _  Y# v6 l) M: e
% ~0 b( ^( W3 x& R
    您真是好人。

深海寂寞鱼

回复 7# leedh1223
9 O  J" w* w6 R8 k0 [. J, l. G& T! N4 u2 a
to leedh1223:; a, k  d  Y1 P: [6 X, n1 o
   
. T# G5 ~) `3 j, p5 q2 `1.     用贴壁方法培养神经干细胞既可以直接从原代取材开始，也可以将你已经养成的神经干细胞换用这种方法。如果是后者的话，你只需要将你的神经球消化后直接接种到包被好的培养瓶/培养皿里即可。7 b' q& l+ ~5 Y7 k) i2 Z, B

5 v5 G. y, a. k0 n6 j' s2.     贴壁培养下的神经干细胞分化的比例不高，如果需要分化的话，根据你想要分化的方向改变培养基就可以了。具体你可以看看我上传的文献。
: `4 `* Q6 H: W3 R) A! O: I0 a, B. V4 N) S
     如果有问题，咱们可以再讨论。