贴壁培养神经干细胞

smkx

请问有没有人用贴壁培养的办法养NSC?
) f8 X( V% }7 N2 e& r效果如何？

iseeyou1210

上周去uk开会听人说了,效果还不错,我正在要protocol.
. w7 w4 i# N1 i' |8 W等等把.

smkx

回复 2# iseeyou1210 " U- e2 {" j# p# l% h

2 z: h# v8 D" I0 F
# a/ t% ~; E9 J" D" T. t" u  p$ U    好，等你好消息

深海寂寞鱼

to smkx兄：
; C# R8 t3 G* W( P. Q
, A: O. q9 I4 V+ h9 D9 Y    贴壁培养神经干细胞效果十分不错，细胞的增殖状态要比悬浮的神经球培养好很多；
: E4 Y" _9 Z2 T- u: p1 n
: c% L+ f' m* r' }4 l! Z5 O    而且未分化细胞的比例也高。
$ g& K' E. y5 C2 c9 `3 x" ^9 D
' P4 U# D/ @# x9 {2 z+ q/ R; {    培养的方法和咱们通常用的方法大同小异。
: \. o4 h* G3 u, }0 i8 z. b7 n( q
2 X; n# f+ B# ^' j& g7 z    首先注意把培养皿／培养瓶要用Laminine包被好，通常是按1－2ug／cm2，37oC包被过夜。说明书上说的是包被3小时，但是包被过夜效果会很好。$ f; a7 x: i0 s! |0 V2 Y: b2 G, A

, |$ S  [% R0 A% i5 V  T+ c    ～～～～，不过Laminine可是相当贵的，每用一点点我都心疼不已。  U' v2 Y) J4 \3 @: G" M

; n+ y, }3 P/ G9 M4 s$ ?    其次，这个方法最初作者的培养基里N2是自己配制的，提高了N2里每个组分的浓度，他认为这样有利于细胞的贴壁。但是我培养的时候没有按他的方法配制N2，还是用的invitrogen商品化的N2，觉得效果也不错。' u- y3 h9 N+ i1 U
& n2 l+ R$ K, z
    再者，我是用sigma的Accutase消化的组织（37oC，15－20分钟），觉得细胞的活性很好。  Y; L# a1 @4 r6 b; q& c
5 M: ]) c0 p4 }4 \5 I
    最后补充一下，这个方法不是什么新东东，在一些研究神经干细胞的实验室这是一个很成熟的方法。只要认真按照经典文献去做，一定能够成功的。
5 n0 I- ?5 }% I/ s; }
% R+ v: }: j, L/ @9 b. g0 L    祝好运！！

smkx

; K8 r$ b2 U, n# s# A1 @! M% c" m

( ~; b3 }: k. n+ i回复 4# 深海寂寞鱼 * [( N3 z5 `$ K/ H

. O4 q& Q, G5 e; ^, `/ f0 n; Q$ F
    谢谢这位前辈高手，不知道您说的经典文献是哪些篇，可以传上来或者告诉我title吗，再次感谢！

深海寂寞鱼

回复 5# smkx % a& c* d! i# o2 m' b+ N1 W

2 x3 O2 l$ n. _" t2 pto smkx兄：0 p; A3 j. d2 Y# u3 ^1 z8 D1 `

- s/ S1 S. l3 n9 ~  B1 s  U# S    这方面研究中，有三篇文献相对比较经典，分别是：2 S7 b+ o* L0 o1 ^2 ^
0 J9 @# K) s- L" V/ Z3 N
1. Conti, L., Pollard, S.M., Gorba, T., Reitano, E., Toselli, M., Biella, G., Sun, Y.,Sanzone, S., Ying, Q.L., Cattaneo, E., et al. (2005). Niche-independent: \# l  q' o8 p" ^% m! K
symmetrical self-renewal of a mammalian tissue stem cell. PLoS Biol. 3, e283+ a% W/ `- D: i
1 [2 c0 x$ J8 @2 q& V5 w
2. Pollard, S.M., Conti, L., Sun, Y., Goffredo, D., and Smith, A. (2006). Adherent neural stem (NS) cells from fetal and adult forebrain. Cereb. Cortex 16(Suppl 1), i112–i120.
: P1 r+ i3 E" T: ]' m2 y: W: y8 p8 F% O7 `  p, K, V0 \
3. Sun, Y., Pollard, S., Conti, L., Toselli, M., Biella, G., Parkin, G., Willatt, L., Falk, A., Cattaneo, E., and Smith, A. (2008). Long-term tripotent differentiation, T4 E& M' |( T
capacity of human neural stem (NS) cells in adherent culture. Mol. Cell. Neurosci. 38, 245–258.0 X% y/ P( ~8 `  J' k5 ^7 M
* X: _. `6 {# j* c$ V& P, ~
全文PDF版如下，希望对你能有所帮助。6 g  H7 `0 V8 C% U; D
1. / J9 Z1 \, m6 Q
2. / X( h' j9 f$ ^# b. @, c
3.

leedh1223

我想问一下用贴壁培养的方法来培养神经干细胞，从原代取材就开始的吗？还是到后期才换用这种方法的？

leedh1223

还有，贴壁培养干细胞，那它分化的比例高吗？

smkx

回复 6# 深海寂寞鱼 ( V( A8 L2 e3 s3 d. D, j
2 _4 `6 q2 d$ r1 }2 {! q

' p7 v- w) y1 A) _% v* R. }    您真是好人。

深海寂寞鱼

回复 7# leedh1223 ' a' j3 |/ p# R, G- [7 Z

; T% y% q. D6 _! g7 _( t) g: b7 lto leedh1223:
" n/ _# @- G$ y: p   
& a  d3 m: H! i/ M% u- y$ C4 m1.     用贴壁方法培养神经干细胞既可以直接从原代取材开始，也可以将你已经养成的神经干细胞换用这种方法。如果是后者的话，你只需要将你的神经球消化后直接接种到包被好的培养瓶/培养皿里即可。- S* U" [$ J5 [; q" _
8 ?+ x9 `! k# l0 A  O9 O. m
2.     贴壁培养下的神经干细胞分化的比例不高，如果需要分化的话，根据你想要分化的方向改变培养基就可以了。具体你可以看看我上传的文献。( w& r% r/ }9 ~+ A& e) E
& u0 a8 y9 B, g5 i, d
     如果有问题，咱们可以再讨论。