贴壁培养神经干细胞

smkx

请问有没有人用贴壁培养的办法养NSC?
% U7 l% f9 |/ i  p8 t+ M效果如何？

iseeyou1210

上周去uk开会听人说了,效果还不错,我正在要protocol.( T. P# n! X  o9 Z
等等把.

smkx

回复 2# iseeyou1210
5 U; F+ ~7 R+ [$ z5 D, b
- u# T1 x! ]( x  n
% o9 @6 }* q% p- s. M- T    好，等你好消息

深海寂寞鱼

to smkx兄：
0 e! s  z' z$ ^2 A) Z+ k( ~& J
    贴壁培养神经干细胞效果十分不错，细胞的增殖状态要比悬浮的神经球培养好很多；; g# v' J7 F6 [3 m5 g) }' G# S
3 l; ~2 U9 v; {: E9 O8 m/ O4 Y" U
    而且未分化细胞的比例也高。
* U. Q" t. Q4 m; H
1 F. _4 e. _: O2 ^5 g6 @# \- T    培养的方法和咱们通常用的方法大同小异。6 G) Y# N, [! J+ J/ o: o
* P  G% p6 g5 W: l2 e9 ~, Y2 T
    首先注意把培养皿／培养瓶要用Laminine包被好，通常是按1－2ug／cm2，37oC包被过夜。说明书上说的是包被3小时，但是包被过夜效果会很好。
) n) I9 b  E8 a' N( U6 w
6 x) Y  A% b2 y+ o  H9 h. z. j0 k  l    ～～～～，不过Laminine可是相当贵的，每用一点点我都心疼不已。! A& B) ~% ]! T: P3 @

. j" C1 [, f5 s: e' T; b: M+ X    其次，这个方法最初作者的培养基里N2是自己配制的，提高了N2里每个组分的浓度，他认为这样有利于细胞的贴壁。但是我培养的时候没有按他的方法配制N2，还是用的invitrogen商品化的N2，觉得效果也不错。
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9 H! Q3 C( A, A3 ~  M3 w7 n    再者，我是用sigma的Accutase消化的组织（37oC，15－20分钟），觉得细胞的活性很好。+ v! W! a6 q' }# {

0 T0 |0 c% a' O) P/ }4 z    最后补充一下，这个方法不是什么新东东，在一些研究神经干细胞的实验室这是一个很成熟的方法。只要认真按照经典文献去做，一定能够成功的。
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    祝好运！！

smkx

' q( ~; s$ H8 U! q. {3 w
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回复 4# 深海寂寞鱼 * S2 i2 f6 V+ d7 M7 }3 V/ |
6 d! b; a% G: y+ I6 z

7 L+ F+ }- m8 g  \6 Z! c" Z    谢谢这位前辈高手，不知道您说的经典文献是哪些篇，可以传上来或者告诉我title吗，再次感谢！

深海寂寞鱼

回复 5# smkx ( _6 |# i  q- y! p3 S" B3 k) B) z
0 f' _% s+ \5 H4 j' f' E* O# C) `
to smkx兄：
) O" i5 B0 x1 [9 |/ D2 r4 D& a: a( q1 @& `( |. w. R
    这方面研究中，有三篇文献相对比较经典，分别是：0 g& b, n& e8 Y  n5 E) P
  @8 Z4 M9 u  ^' y, d3 l
1. Conti, L., Pollard, S.M., Gorba, T., Reitano, E., Toselli, M., Biella, G., Sun, Y.,Sanzone, S., Ying, Q.L., Cattaneo, E., et al. (2005). Niche-independent
# }5 |9 r# h1 N! W( J: U* Tsymmetrical self-renewal of a mammalian tissue stem cell. PLoS Biol. 3, e283/ s: ~: N  I# s0 Y6 ?; Y

* w) t2 B2 Q+ K, Q2. Pollard, S.M., Conti, L., Sun, Y., Goffredo, D., and Smith, A. (2006). Adherent neural stem (NS) cells from fetal and adult forebrain. Cereb. Cortex 16(Suppl 1), i112–i120.
" N) E5 h: n% Q$ Q0 @" O7 M( E: t$ b6 U9 Y& z" R
3. Sun, Y., Pollard, S., Conti, L., Toselli, M., Biella, G., Parkin, G., Willatt, L., Falk, A., Cattaneo, E., and Smith, A. (2008). Long-term tripotent differentiation. ~; R$ D0 U/ b% ?5 w* Q
capacity of human neural stem (NS) cells in adherent culture. Mol. Cell. Neurosci. 38, 245–258.
( L) R: [0 J5 W7 w! \* R3 O8 J3 v* l; i
全文PDF版如下，希望对你能有所帮助。7 T/ k7 N  J! f9 \; c% z4 n5 l0 i
1.
1 h; K) S# U5 E7 X- `6 x" u9 s0 [2. 4 W' H  \3 F+ D" r# }1 s# E4 j8 p& v
3.

leedh1223

我想问一下用贴壁培养的方法来培养神经干细胞，从原代取材就开始的吗？还是到后期才换用这种方法的？

leedh1223

还有，贴壁培养干细胞，那它分化的比例高吗？

smkx

回复 6# 深海寂寞鱼
  d0 V9 K& i- c/ `( Z" K9 _3 {1 `
+ O  i' p0 {  p8 j' `( `( r3 ?: \& x$ D* u1 c
    您真是好人。

深海寂寞鱼

回复 7# leedh1223
. u, \+ _) m: O2 O4 z- R
& R1 U) b" [. z% p3 s3 \0 U# Yto leedh1223:
$ w1 \2 T& d% F1 a/ F* ^   
% t  Y. m/ o# }- f" V9 u" T1.     用贴壁方法培养神经干细胞既可以直接从原代取材开始，也可以将你已经养成的神经干细胞换用这种方法。如果是后者的话，你只需要将你的神经球消化后直接接种到包被好的培养瓶/培养皿里即可。
  j2 c- g$ M4 X: N( }5 v7 ?( h  c5 `) d3 G# L
2.     贴壁培养下的神经干细胞分化的比例不高，如果需要分化的话，根据你想要分化的方向改变培养基就可以了。具体你可以看看我上传的文献。3 s9 t8 y* x* Q% V' k; ^

+ b- N1 B6 E2 D* p$ g) T, J     如果有问题，咱们可以再讨论。