贴壁培养神经干细胞

mujinfei1984

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您好，冒昧打扰。想知道你最近NSC转染情况，是否已经筛出细胞？我QQ：4716616，如果方便，加我的QQ指导一下，十分感谢！

mujinfei1984

mujinfei1984 发表于 2011-5-9 16:00
6 m: `# l$ Z9 c回复 深海寂寞鱼 的帖子$ S, x0 i3 s- P" R- |& s
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您好，冒昧打扰。想知道你最近NSC转染情况，是否已经筛出细胞？我QQ：4716616，如 ...

7 A- u. L( ]! ?这几天我尝试在贴壁培养条件下进行细胞转染。分别使用了invitrogen公司的Lipofectamine 2000和Roche公司的FuGENE HD两种转染试剂。转染条件均是按照各自的说明书操作。

深海寂寞鱼

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to mujinfei1984：4 c- v, c( W/ W; e

- A- D3 l5 K& \( P. O9 @) w9 s: ?; x    从你的问题来看，你应该是想对贴壁培养的NSC进行稳定转染。- F. Z1 {) ?4 _

7 m+ q8 X' M- N    invitrogen公司的Lipofectamine 2000和Roche公司的FuGENE HD两种转染试剂我都进行过尝试，并且做流式检测了瞬转的效率，大约在5%－10%之间。
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( T, H% u- e# P1 y    以这样的效率筛稳转，是相当有难度的。我仅仅筛选到两个克隆。1 V7 ]# W5 C6 L( `  Z% o
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     如果你条件允许的话，推荐你用慢病毒载体做。这样要容易的多。
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5 h/ h: y' ]0 @* Y: V     以上仅仅是我个人的一些经历，不太具有代表性。如果有问题，欢迎继续交流。
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mujinfei1984

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! f1 V+ X" y) t- {8 ~8 |& S/ n% i! o$ j回复 深海寂寞鱼 的帖子
" o/ @3 k2 J( i1 ?% s# Q8 R+ {8 p* ]4 E
你的意思是，从你开始做转染到现在，一共得到两个克隆？还是每批都大概有两个克隆？我的情况可能和你差不多，做了十几批二十批的，电转啊脂质体啊，一共也没出几个

深海寂寞鱼

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5 p2 n- j  k% f! gto mujinfei1984：5 V3 G9 c8 v/ z# Z" V

; ^+ z% \8 k# A; v1 e7 p' i    我基本上是每转染一个3.5cm皿（或者六孔板一个孔）能有两个克隆的样子。
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# ^2 }5 G9 u( z1 y0 T3 s0 m  e7 w    因为转染效率不高，所以筛稳转很困难。
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; b- F- Z4 G4 t3 Q    建议你试试病毒载体，比如慢病毒载体。

mujinfei1984

回复 深海寂寞鱼 的帖子4 f, ^0 n: E( w( D. l8 g3 n
; l; H, J% F& _3 a, f1 e  V* f
那你做的还挺好的，已经收到你的建议，用慢病毒载体条件还是有些不允许，我转染很多次了，能出克隆的次数极少。能否加我QQ详细指导我一下，先谢过了！

深海寂寞鱼

回复 mujinfei1984 的帖子+ S, {3 C, F; ?9 I
3 W, _+ _5 T/ L8 |7 C$ W

- D6 z$ @8 X/ B$ E! `% z5 Q# P; l3 d  To  mujinfei1984：5 E  e! c  E9 }; h& D
2 l4 S7 Z, i5 F; o6 [
   关于可否留下QQ的问题我曾经问过细胞海洋版主，他的建议是凡是有关实验的东东，
. R5 Y3 I. X1 H( l2 e
/ Z0 J2 q- V1 n8 b- T/ {$ o6 [    还是尽量在论坛里发帖求助，以方便更多人的参与交流。6 [4 ~# y4 p( \& A
7 L/ |5 E, n5 y" N* x
    也可以让更多的人给你的实验提出好的建议。" M/ \( b/ f! h  g( s# V
0 L& @, q% _* Q; Q5 D4 k1 v8 O
    所以实在不好意思。请你见谅。

mujinfei1984

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' X( ]& L- `. l1 m) O( k: }$ p2 q0 u7 A) B. x7 a7 Y
我发了贴，没人搭理我。好吧，没关系。你做的什么动物的神经干细胞？（不同物种之间差别大吧？）G418浓度？大概筛选了多少天才出克隆？先了解一下你情况！

OBGYNob

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0 v" l$ l$ }9 R/ D9 A
! G0 d) X$ O8 i+ @请问这位高手，培养瓶或者培养皿能不能改用明胶包被呢？

深海寂寞鱼

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2 x0 |& g9 i( P7 ?# ?    To OBGYNob战友:% A, @4 N. C. i1 [+ c5 S
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    单纯使用明胶包被, 应该是不可以的.. V+ g9 Q+ Q5 o+ l. i2 P
# r! |" _0 a2 R) p  J, f* w; o% z
     明胶包被仅仅能提供一个更好的贴壁环境.
# W6 @3 {7 c3 t! o0 c$ u& N+ y8 V' h5 I+ ]& G" W
     然而神经干细胞培养时,很重要的一个的问题就是要维持干细胞的未分化状态.
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     由于单纯的明胶包被无法提供一个很好的维持神经干细胞未分化状态的微环境,
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: K$ V: I6 V5 `7 I     因此, 很可能会引起细胞的分化. 不适合用于神经干细胞的培养." g) G# N  Q: j

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